刘情
- 作品数：4 被引量：35H指数：3
- 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家农业科技成果转化资金项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭瘟病毒胸苷激酶基因的原核表达及其蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2015年
- 本研究旨在以表达纯化的鸭瘟病毒胸苷激酶(thymidine kinase,TK)重组蛋白作为包被抗原,建立检测鸭瘟病毒抗体的间接ELISA方法。根据GenBank上收录的鸭瘟病毒TK基因序列设计出1对引物,采用PCR扩增出鸭瘟病毒TK基因。将TK基因与原核表达载体pET-32a连接,通过PCR、双酶切和测序鉴定,将阳性重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达。采用切胶纯化的方法纯化蛋白,Western blotting分析鉴定表达产物。用纯化的TK重组蛋白作为包被抗原,并优化其他条件,最终建立检测鸭瘟病毒抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组质粒构建成功,经Western blotting检测得到目的蛋白,TK重组蛋白能被阳性血清识别,说明该重组蛋白具有较好的抗原性。确定了最佳反应条件:酶标二抗的最佳稀释度为1∶200,最佳抗原、抗体的稀释度分别为1∶400和1∶200,抗原抗体作用时间为60min,最佳封闭液为5%BSA,最佳封闭时间为60min,最佳显色时间为10min。结果表明,该方法具有良好的稳定性及较高的敏感性,为鸭瘟的检疫、监测和防制工作提供了一种有效的手段。
- 刘情邓伯雄刘亚刚
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达间接ELISA
- 鸭致病性大肠杆菌分离鉴定及其相关致病性分析被引量：18
- 2016年
- 为研究鸭大肠杆菌的致病性及相关生物特性,本试验从西昌市某规模化鸭场采集病料,通过传统分离培养及理化性质鉴定,分离得到27株鸭致病性大肠杆菌。对27株鸭致病性大肠杆菌进行血清型鉴定、药敏试验、相关毒力基因检测。血清型鉴定结果显示,优势血清型为O119、O86、O126、O142和O44,占分离株55.56%。血清型O119占27株鸭致病性大肠杆菌的40.74%,为该鸭场流行的致病血清型。对20种兽医临床常用药物的药敏试验结果显示,27株鸭致病性大肠杆菌均对阿米卡星、庆大霉素和多黏菌素B敏感,对头孢曲松等10种药物较敏感,对利福平等5种药物耐受。大肠杆菌相关毒力基因检测结果显示,iutA、hlyF、Iss、IroN、ompT、fyuA、irp2、Tsh及papA基因携带率均为100.00%,fimC基因携带率59.26%,K99基因携带率7.40%。各项研究结果为有效防控鸭大肠杆菌病提供了重要科学依据,并为大肠杆菌深入研究奠定了基础。
- 邓伯雄刘情邓安元李文文宋志刚余琼陈光芬刘述皇刘亚刚
- 关键词：耐药性
- 牛病毒性腹泻病毒间接ELISA方法的建立被引量：14
- 2015年
- 持续性感染和免疫耐受是牛病毒性腹泻病的重要特征,也是该病的防控难点。本试验将2种生物型的牛病毒性腹泻病毒(BVDV):致细胞病变(CP)型(BVDV OregonC24株)和非致细胞病变(NCP)型(BVDV Yak株),灭活、浓缩作为抗原,分别免疫家兔制备高免血清。同时,使用BVDV全病毒蛋白作为包被原,建立了检测BVDV的间接ELISA检测方法。本试验利用该方法对高免血清进行检测,探讨CP型BVDV与NCP型BVDV抗原免疫原性差异。结果显示,CP型BVDV的高免血清效价均比NCP型BVDV高免血清的效价高,平均高35%。结果表明,CP型BVDV的免疫原性优于NCP型BVDV,且CP型BVDV与NCP型BVDV的血清效价具有明显差异。这为在实践中疫苗毒株筛选及生产提供了理论指导。
- 李文文刘情刘亚刚
- 关键词：间接ELISA免疫原性
- 鸭瘟病毒强、弱毒株TK基因的克隆与生物信息学分析
- 2018年
- 本研究根据Gen Bank上发表的鸭瘟病毒(DPV)基因序列设计了1对引物,分别对DPV AV 1221株和DPV鸡胚化弱毒疫苗株的TK基因进行扩增,扩增的目的片段克隆至载体p MD19-T,经PCR和双酶切(Bam HⅠ+HindⅢ)鉴定,将阳性质粒进行测序和生物信息学分析。结果成功克隆出了长度均为1 077 bp的DPV TK基因,生物信息学分析结果表明两个片段的同源性达到100%。
- 任攀刘情李文文刘亚刚
- 关键词：鸭瘟病毒TK基因生物信息学分析
