王秋霞
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：南京农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学文化科学农业科学更多>>
- 琼脂糖凝胶电泳实验规范管理的实践与探索
- 2018年
- 琼脂糖凝胶电泳技术是农业科学、生物化学和分子生物学实验中常用的方法,在高校实验室被广泛应用。常用溴化乙锭是一种有毒试剂,操作过程必须规范严格。由于高校琼脂糖凝胶电泳实验室人员繁杂,在使用过程中普遍存在操作不规范现象。针对此问题,我们对该实验操作过程中的注意事项和规范管理进行了积极的实践和探索,取得了一定的成效,希望能为其他实验室管理者提供参考和借鉴。
- 王秋霞王智慧郑颖唐玲周少霞
- 关键词：琼脂糖凝胶电泳
- 基于LC-MALDI的蛋白质组学技术建立与评价被引量：2
- 2016年
- 建立了一套适用于LC-MALDI系统的标记定量蛋白质组学分析技术,主要包括蛋白提取、溶液内酶解、肽段标记、液相分离、质谱检测、生物信息学分析等步骤。将该方法与传统的双向凝胶电泳技术进行了比较与评价,该方法的实验结果可靠、灵敏度高、实验周期短。为今后的蛋白质组学研究工作提供了有效的参考与借鉴。
- 陈默王秋霞郑颖唐玲周少霞付鹏马洪雨
- 关键词：蛋白质组学
- piggyBac转座子AgoPLE1.1在黑腹果蝇种系转化中的应用
- 2021年
- 【目的】通过检测黑腹果蝇Drosophila melanogaster中piggyBac(PB)转座子AgoPLE1.1的转化活性,明确AgoPLE1.1开发为昆虫转基因载体的潜力。【方法】构建AgoPLE1.1转座酶辅助质粒pAgoHsp和带有红色荧光标记的供体质粒pXLAgo-PUbDsRed,辅助质粒和供体质粒以170 ng/μL∶400 ng/μL,90 ng/μL∶200 ng/μL和90 ng/μL∶100 ng/μL 3种不同的比例混合后分别注射新鲜的W1118黑腹果蝇胚胎,筛选注射后代中的转基因黑腹果蝇个体;利用Southern杂交验证转基因黑腹果蝇中AgoPLE1.1转座子的插入拷贝数;利用染色体步移技术克隆AgoPLE1.1插入位点旁侧序列,明确AgoPLE1.1转座子的转座特征。【结果】AgoPLE1.1转座子在黑腹果蝇中具有转化活性,转基因频率为1.32%~1.94%。Southern杂交结果显示,AgoPLE1.1转座子在黑腹果蝇中至少有6个插入位点。染色体步移法克隆了其中4个位点,分别位于黑腹果蝇的3R,3L,2L和X染色体,并且AgoPLE1.1转座子在黑腹果蝇染色体中的整合带有供体质粒的骨架。【结论】PB转座子AgoPLE1.1仅可以在黑腹果蝇中以较低的频率进行非精确的剪切和转座,不具有开发为新型昆虫转基因载体的潜力。
- 张浩淼王晓芳罗光华韩湘豫王秋霞韩召军吴敏
- 关键词：黑腹果蝇PIGGYBAC转座子剪切转座
- EIN因子在HrpN_(Ea)诱导拟南芥蚜虫抗性机制中的调节作用被引量：1
- 2009年
- 为明确蚜虫对不同拟南芥品系经HrpNEa蛋白诱导后的寄主选择机制,利用刺吸电波技术(EPG)记录了桃蚜在EVP(Empty Vector Preparation)与HrpNEa处理的拟南芥野生型Col-0和乙烯通路突变体ein2-1、ein5-1上的刺吸取食波形,比较了桃蚜在拟南芥不同处理材料上的驱避行为。研究结果显示:EVP与HrpNEa处理拟南芥后,桃蚜在ein2-1上取食时,反映被动取食行为的E波比例和平均周期没有明显差别,而在Col-0和ein5-1上取食时,EVP处理与HrpNEa处理均有明显差别,且驱避数据与EPG结果一致。表明HrpNEa可以通过激活乙烯信号通路重要因子EIN2诱导植物抗虫性。EVP与HrpNEa处理后3种拟南芥材料叶片的胼胝质染色测定结果也支持上述结论。
- 张书萍张春玲王秋霞董汉松
- 关键词：拟南芥桃蚜抗性诱导
- 灰飞虱羧酸酯酶LsCarE1介导杀虫剂抗性被引量：3
- 2017年
- 【目的】我们前期的研究发现,在灰飞虱Laodelphax striatellus抗毒死蜱品系、抗吡虫啉品系和抗溴氰菊酯品系中的总酯酶活力都明显升高。本研究旨在筛选导致总酯酶活力升高的酯酶基因并验证其在抗药性中的作用。【方法】通过转录组测序和RT-qPCR比较抗、感灰飞虱品系雌成虫中各个酯酶基因的表达量;采用显微注射技术建立超量表达灰飞虱羧酸酯酶基因的果蝇品系;并利用生物测定技术检测过量表达灰飞虱酯酶基因的果蝇对毒死蜱、吡虫啉和溴氰菊酯的敏感性。【结果】通过转录组数据和RT-q PCR筛选到羧酸酯酶基因LsCarE1(Gen Bank登录号:HM600723)在3个灰飞虱抗性品系中均过量表达。将LsCarE1基因按黑腹果蝇Drosophila melanogaster偏好的密码子优化后构建转基因载体质粒pUAST-att B-LsCarE1^(Optimized),成功建立纯合的转基因果蝇品系UAS-LsCarE1^(Optimized)。利用GAL4启动品系da-gal4与UAS-LsCarE1^(Optimized)品系杂交,获得超量表达LsCarE1的果蝇品系da>LsCarE1^(Optimized)。定量PCR检测发现,目标基因LsCarE1在超量表达品系da>LsCarE1^(Optimized)中的表达量是对照品系UAS-LsCarE1^(Optimized)中表达量的257.3倍;而另一对照品系da>gal4中没有检测到LsCarE1的表达。此外,黑腹果蝇内源的酯酶同源基因表达量显著低于目标基因的表达量。生物测定结果显示,与对照组da>gal4果蝇品系相比,启动超量表达LsCarE1的转基因果蝇da>LsCarE1^(Optimized)对毒死蜱和吡虫啉的耐药性分别提高了4.19和2.46倍,但对溴氰菊酯的耐药性无显著变化。【结论】LsCarE1的过量表达与灰飞虱对毒死蜱和吡虫啉的抗性相关。
- 王芮张浩淼邓蕾肖倩倩王秋霞刘广娜韩召军吴敏
- 关键词：灰飞虱羧酸酯酶
- 关于提高实时荧光定量PCR仪使用效率的思考——以南京农业大学植物保护学院为例被引量：1
- 2014年
- 本文根据高校实验室实时荧光定量PCR仪的特点和使用现状,针对预约管理、使用培训、操作规则及基本维护方面存在的不足,分析了形成的原因,提出了改进措施,旨在提高效率,更好地服务于高校的科学研究和人才培养。
- 王秋霞马洪雨郑颖唐玲
- 关键词：预约
