公共文化服务平台

共 5 条记录，以下是 1-5

全选清除导出

排序方式：

柯萨奇病毒A组5型VP1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备: 2020年; 目的原核表达柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5,CV-A5)VP1蛋白,并制备抗VP1多克隆抗体(多抗),为CV-A5相关定性定量研究制备试剂。方法逆转录PCR扩增N端截短的CV-A5VP1-ΔN56后,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN56。将其转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达重组蛋白并纯化。用纯化的谷胱甘肽巯基转移酶-VP1-ΔN56融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔,制备多抗。结果重组表达载体构建成功,融合蛋白以不可溶包涵体存在。ELISA、蛋白质印迹法检测表明,获得的兔多抗效价为107,可特异性识别重组和天然CV-A5 VP1蛋白。结论成功制备重组CV-A5 VP1蛋白及特异性多抗。为中和抗原表征研究及VP1定性定量分析奠定了基础。; 靳卫平卢佳吴杰胡岗周金戈王文辉王泽鋆孟胜利申硕; 关键词：原核细胞多克隆抗体 VP1

柯萨奇病毒A6型多克隆抗体的制备及鉴定: 2020年; 目的制备兔抗柯萨奇病毒A6型(Coxsackie virus A6,CVA6)多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法将杆状病毒-昆虫细胞表达系统中共表达的CVA6病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)纯化后免疫日本大耳白兔,制备其多克隆抗体;用CVA6-R69-XY-2016、CVA10-R97-XY-2016、CVA16-V217-XY-2016、EV71-V54-XY-2016及CVA6 Gdula毒株分别感染人恶性胚胎横纹肌瘤RD细胞,体外中和试验及ELISA法检测中和抗体和结合抗体效价,Western blot法及间接免疫荧光试验(indirect immunoinfluscent assay,IFA)检测抗体特异性。结果制备的兔抗CVA6 VLP多克隆抗体与CVA6-R69-XY-2016及CVA6 Gdula毒株的中和抗体效价均可达1024,多克隆抗体仅与这2种病毒的结构蛋白VP1、VP2及VP3产生特异性反应,仅在这2种病毒感染的RD细胞中产生明显的绿色荧光;经ELISA分析,其结合效价达1×10^7。结论成功制备了兔抗CVA6 VLP多克隆抗体,其特异性良好,可为CVA6血清型中和试验鉴别、病毒结构蛋白定性定量分析提供抗体试剂。; 魏真妮孟晓丹陈静王文辉卢佳卢佳吴杰郭靖王泽鋆吴杰申硕; 关键词：病毒样颗粒多克隆抗体

GⅡ.17型诺如病毒多克隆抗体的制备及应用被引量：3: 2017年; 目的制备兔抗GⅡ.17型诺如病毒(GⅡ.17norovirus,GⅡ.17 NoV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)多克隆抗体(兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体),用其建立组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并对其进行初步应用。方法制备并纯化GⅡ.17 NoV VLPs,采用SDS-PAGE、电镜观察和粒径检测方法对其进行鉴定。将其免疫家兔制备兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,经Western blot对其进行鉴定,并用ELISA检测其效价及特异性。筛选与GⅡ.17 NoV VLPs结合力强的唾液HBGA受体类型,优化GⅡ.17NoV VLPs质量浓度及多克隆抗体稀释度,用兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体建立HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并进行特异性验证及初步应用。结果 GⅡ.17 NoV VLPs经检测纯度为95%,且颗粒形态完整,粒径均一。制备的多克隆抗体在Western blot可见特异性条带,效价可达1∶25 600 000,并对其他基因型(GⅠ.2、GⅠ.7、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.7)VLPs的交叉反应较弱。GⅡ.17 NoV VLPs和A、B、O和AB 4种血型的唾液HBGA均能结合,差异无统计学意义(P>0.05);以GⅡ.17 NoV VLPs质量浓度为0.25μg/m L,多克隆抗体的稀释度为1∶160 000建立了HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并应用该方法对不同剂量GⅡ.17 NoV VLPs免疫的小鼠血清进行了半数阻断滴度检测。结论成功制备了高效价兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,建立了HBGA-GⅡ.17NoV VLPs阻断试验,且该方法特异性良好,可用于GⅡ.17 NoV VLPs免疫效果的评价。; 王文辉万鑫霍玉奇凌同丁力孟胜利王泽鋆申硕; 关键词：病毒样颗粒多克隆抗体 NOV

2018年福建省首例疑似狂犬病病例的病毒分离鉴定及G基因序列分析被引量：1: 2020年; 目的对2018年福建省首例疑似狂犬病病例进行病毒分离鉴定及G基因序列分析。方法收集2018年福建晋江送检的疑似狂犬病患者的血液、唾液及脑脊液样本,进行实验室诊断,昆明乳鼠颅内接种唾液及脑脊液样本,酶联免疫法检测狂犬病病毒(rabies virus,RABV)抗原;免疫荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测血液样本中抗RABV中和抗体;提取接种唾液的乳鼠脑悬液RNA,RT-PCR扩增G基因序列,将其与国内外疫苗株、福建省及相邻省分离的街毒株序列构建NJ(Neighbor-Joining)分子系统进化树,并进行同源性分析。结果血液样本中未检出抗RABV中和抗体;经乳鼠颅内接种及RT-PCR法,仅唾液样本检测出RABV,确诊患者为狂犬病病例,新分离的街毒株命名为18FJ01。该毒株G基因开放阅读框全长1575 bp,编码524个氨基酸,属基因Ⅰ型RABV,与山东省CTN-33疫苗株的亲缘关系最近,与国内PV、aG、HEP-Flury及ERA疫苗株亲缘关系相对较远;与福建邻近省份街毒株核苷酸及氨基酸序列的同源性分别为84.3%~97.8%和92.9%~98.8%,与国内外疫苗株核苷酸及氨基酸序列的同源性分别为80.1%~93.2%和88.9%~96.9%。结论成功对该病例进行了病毒分离及鉴定,该毒株与CTN-33疫苗株同源性较高。; 孟胜利李茜颜长护庄鸿志麦健仪吴杰王文辉王泽鋆; 关键词：狂犬病病毒进化分析

CV-A4单克隆抗体制备及候选疫苗型特异性定量分析方法的建立和验证: 2023年; 为制备柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CV-A4)单克隆抗体并鉴定其生物学特性,同时为初步建立CV-A4抗原定量ELISA检测法,用于CV-A4候选疫苗研制中的抗原定量检测及质量控制,将纯化后的CV-A4全病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术、中和试验和ELISA获得CV-A4单克隆抗体;建立双抗体夹心ELISA检测法并进行方法学验证,用于检测手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)多价疫苗中CV-A4抗原水平。结果显示,制备了型特异性CV-A4单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA检测法,检测范围为62.5~4000.0 ng/mL;高、中、低3个浓度样本准确度验证,回收率为91.8%~121.9%;重复性验证,变异系数分别为3.4%、11.9%和8.6%;中间精密度验证,变异系数分别为1.8%、9.4%和6.5%;耐用性验证,回收率为97.3%~104.1%;包被微孔板37℃放置3 d,样本回收率为98.5%~119.2%;在特异度验证中,双抗体夹心ELISA检测法仅识别CV-A4抗原,与CV-A4以外的抗原均无交叉反应。由此,新建立的双抗体夹心ELISA检测法可用于纯化过程样本的CV-A4抗原检测,也可定量分析HFMD多价疫苗中CV-A4组分,这为多价疫苗的研制奠定了基础。; 田宇璇汪梦俊王文辉吴杰郭靖申硕; 关键词：单克隆抗体双抗体夹心酶联免疫吸附试验抗原检测

全选清除导出

共1页<1>

王文辉

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

王文辉

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈