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黄瓜绿斑驳花叶病毒外壳蛋白基因原核表达及抗血清制备被引量：3: 2017年; 将黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV上获得pEHISTEV-CGMMV-CP,转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,表达出分子量为19.5 kD的CGMMV CP融合蛋白。切胶回收诱导表达的CGMMV CP免疫家兔,制备抗血清。Western Blotting检测发现,制备的抗血清能与CGMMV CP发生特异性免疫反应,与同属的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)无反应。琼脂双扩散试验测定,制备抗血清的效价为1∶16,ELISA测定效价为1∶1024。该血清特异性强、效价高,可用于CGMMV的检测。; 刘锦李亦晴黄显德房乐李向东田延平; 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒外壳蛋白基因原核表达抗血清

烟草环斑病毒RT-PCR检测体系的优化被引量：1: 2021年; 烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的代表种,是我国公布的二类进境检疫有害生物。建立特异性强、灵敏性高的检测体系是有效控制TRSV传播的技术保障。本研究在分析引物的特异性、优化退火温度及dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶浓度的基础上,建立了完善的TRSV RT-PCR检测体系。筛选出的TRSV特异性引物对为1-1F/1-1R,在退火温度为53℃、dNTPs终浓度为0.075 mmol/L、引物终浓度为0.30μmol/L、Taq DNA聚合酶终浓度为0.035 U/μL条件下检测效率最高,可从发病植物总RNA量为0.090 ng中检测到目的片段。研究结果对准确灵敏地检测TRSV具有重要意义。; 郇晓雪刘晓宇房乐杜传印李广强耿超李向东田延平; 关键词：烟草环斑病毒

甘蔗花叶病毒第Ⅳ组分离物RT-PCR检测体系的建立及应用被引量：3: 2017年; 甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮化叶病的主要病毒。根据其基因组序列,SCMV可以分为4个组,其中第Ⅳ组分离物属于新出现的强毒株系。为了快速检测SCMV尤其是Ⅳ组分离物的发生情况,我们针对SCMV Ⅰ-Ⅳ组及Ⅳ组分离物设计了6对引物,从中筛选出特异性最强的2对引物(Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R),进行PCR体系的优化。优化后的PCR体系为:退火温度51℃,d NTP终浓度为0.1 mM,引物终浓度为0.20μM,Taq DNA聚合酶终浓度为0.015 U·μL^(-1)。利用该体系,引物对Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R均能够从50 ng感病叶片或0.05 ng病毒RNA中检测出SCMV。通过优化两对引物浓度比例建立了能同时检测SCMV所有分离物及第四组分离物的双重PCR体系。利用该体系从山东、河南及云南均检测出SCMV第Ⅳ组分离物的发生。本研究为SCMV尤其是SCMV第Ⅳ组分离物的快速检测提供了技术支持。; 闫志勇程德杰房乐许小洁田延平贾曦李向东; 关键词：甘蔗花叶病毒反转录-聚合酶链式反应

警惕新发病毒番茄褐色皱果病毒Tomato brown rugose fruit virus对我国番茄产业的危害被引量：4: 2020年; 番茄褐色皱果病毒Tomato brown rugose fruit virus(ToBRFV)于2014年首次在以色列发现,随后传播到欧洲、美洲以及亚洲等地。ToBRFV在番茄叶片上引起花叶,更重要的是在番茄果实上引起褐色皱缩斑,导致番茄完全失去商品价值,是番茄安全生产的重大威胁。为遏制ToBRFV的传播,多个国家已经将该病毒列入检疫对象。2019年,我们在山东番茄上检测到该病毒。本文综述了ToBRFV发生与危害、寄主范围和症状、传播方式、基因组结构、检测方法,并提出了防治建议,希望有助于防范该病毒在我国的扩散。; 闫志勇房乐田延平耿超李向东

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房乐