曾阳阳
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：辽宁医学院畜牧兽医学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- MEF2C基因RNA干扰质粒的构建及干扰效率测定
- 2015年
- 为了构建猪MEF2C基因的RNA干扰重组质粒,并筛选出最佳干扰效率的序列,本试验采用RNAi技术,设计并合成了3条针对猪MEF2C基因的RNA干扰序列,构建了RNA干扰重组质粒(命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3),将其转染到小鼠C2C12细胞,并用实时定量PCR检测细胞中MEF2C基因mRNA的表达,Western blot测定细胞中MEF2C基因蛋白的表达。结果表明:重组质粒经PCR扩增后显示产物大小与预期一致,产物经双酶切及测序鉴定该序列与NCBI提供的序列一致。重组质粒转染C2C12细胞后,MEF2C基因mRNA表达受到不同程度抑制,抑制率分别为(33.67±2.51)%、(21.00±3.60)%、(71.67±4.04)%。Western blot结果表明MEF2C基因蛋白表达受到不同程度抑制,抑制率分别为(47.33±0.05)%、(38.25±0.16)%、(67.27±0.12)%。本试验成功构建猪MEF2C基因干扰重组质粒,最终确定干扰质粒(siRNA-3)具有最佳干扰效果,证实MEF2C基因的干扰质粒能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为探讨该基因与肌肉肉质性状的关系提供理论基础。
- 曾阳阳朱弘焱田玉民苏玉虹
- 关键词：C2C12重组质粒转染
- 猪MEF2C基因RNA干扰质粒的构建及干扰效率测定
- 引言MEF2C(myosin enhance factor,MEF2C)是具有DNA结合活性的转录因子,可与肌肉特定基因启动子直接结合而调控肌肉发育,如肌肉肌酸激酶(muscle creatine kinase,MCK)...
- 曾阳阳朱弘焱田玉民苏玉虹
- 文献传递
- MEF2C基因RNA干扰质粒的构建及干扰效率测定
- 构建猪MEF2C基因的RNA干扰重组质粒,并筛选出最佳干扰效率的序列.采用RNAi技术,设计并合成3条针对猪MEF2C基因的RNA干扰序列,构建RNA干扰重组质粒(命名为siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),...
- 曾阳阳朱弘焱田玉民苏玉虹
- 关键词：重组质粒
- 猪skMLCK基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率测定被引量：3
- 2016年
- 为了构建猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(sk MLCK)基因有效短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体,筛选出最佳干扰效率的序列,采用RNAi技术,设计并合成3条siRNA干扰序列,插入到慢病毒穿梭质粒(h U6-CMV-puror-Ploy A)上,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,收集病毒上清并进行病毒滴度的测定,将其转染小鼠C2C12细胞,分别用实时定量PCR和Western blot方法检测细胞中sk MLCK基因mRNA和蛋白的表达。结果显示:PCR扩增和测序分析结果显示靶向sk MLCK RNAi慢病毒载体构建成功;转染小鼠C2C12细胞后,sk MLCK基因mRNA和蛋白均受到不同程度抑制,实时定量PCR显示,抑制率分别为(29.2±4.43)%、(76.4±7.33)%、(20.0±1.8)%;Western blot显示,抑制率分别为(29.6±5)%、(42.4±1.6)%、(34.3±1.2)%。结论:成功构建猪sk MLCK基因有效shRNA的慢病毒载体,确定干扰载体-2(sk MLCKRNAi-2)具有最佳干扰效果,证实sk MLCK基因RNAi慢病毒载体能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为进一步研究该基因与肌肉肉质性状的关系奠定了基础。
- 曾阳阳朱弘焱田玉民苏玉虹
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体转染
