袁小华
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：西安医学院附属医院更多>>
- 发文基金：陕西省教育厅科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Lp-PLA2的重组表达及单克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 目的构建人脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）的表达载体,表达Lp-PLA2重组蛋白,并制备其单克隆抗体（mAb）.方法合成Lp-PLA2基因并插入融合表达载体pBV220的多克隆位点,构建重组表达质粒pBV220/Lp-PLA2.以重组质粒转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性重组子诱导目的蛋白的表达,表达产物的免疫学活性用Western blot进行鉴定.以基因重组的Lp-PLA2蛋白为抗原,常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS-1细胞融合,获得稳定分泌Lp-PLA2 mAb的杂交瘤细胞株,ELISA检测mAb的效价;Western blot检测mAb的特异性.结果酶切鉴定和DNA测序显示Lp-PLA2重组表达载体中含有人Lp-PLA2全长编码序列.将该重组载体转化入大肠杆菌DH5α中表达所得蛋白经Western blot验证为目的蛋白,筛选出2株能稳定分泌特异性抗Lp-PLA2的mAb杂交瘤细胞株.结论该研究成功地构建了Lp-PLA2表达载体、表达出Lp-PLA2重组蛋白,制备出抗Lp-PLA2 mAb,为进一步用于Lp-PLA2的体外免疫学检测奠定了基础.
- 李苏亮齐欣王建军袁小华叶芸
- 关键词：脂蛋白相关磷脂酶A2单克隆重组蛋白
