李玉
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
- 供职机构：河南科技大学食品与生物工程学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程更多>>
- Bacillus cereus MBL13-U胶原蛋白酶的分离纯化及其降解动力学分析被引量：3
- 2017年
- 胶原蛋白酶是特异性水解天然胶原蛋白或明胶的酶类。为制备新型的骨胶原蛋白酶并探讨其降解胶原蛋白的能力,通过采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100凝胶层析等分离纯化步骤,从Bacillus cereus MBL13-U菌株的粗酶液中分离纯化出一种特异性降解牛骨胶原蛋白的胶原蛋白酶(bone-specific collagenase,BSC),对该酶的分子质量、底物特异性和降解能力进行了分析,并构建出其降解牛骨胶原蛋白的动力学模型。结果表明:分离纯化的BSC比活力为5.57×103U/mg,纯化倍数达到42.85倍,分子质量约为52.0 k Da。经特异性分析该酶为骨胶原蛋白酶,且有显著的水解I型胶原蛋白的能力。其水解能力优于其他常用的蛋白酶。构建出该酶降解牛骨胶原蛋白的动力学模型为:降解速率R=(583.813 6E_0+1.296 7S_0)exp(-0.119 0DH),水解度DH=8.403 4ln(1+69.473 8(E_0/S_0)t+0.154 3)t,酶的失活常数K4为64.115 7/h。
- 刘丽莉杨陈柳李玉梁严予李丹孟圆圆代晓凝
- 关键词：胶原蛋白纯化降解
- 复合酶水解卵白蛋白及其特性与结构分析被引量：1
- 2018年
- 为提高鸡蛋清蛋白的功能特性,以鸡蛋卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)为研究对象,采用复合酶(木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶)对其进行酶解改性处理,并分析卵白蛋白功能特性和结构的变化。以水解度为指标,确定了木瓜蛋白酶中性蛋白酶风味蛋白酶的最佳质量比为112。在单因素试验的基础上,通过响应面优化试验确定了复合酶的最佳酶解工艺条件:pH 7.5、酶解时间7h、OVA浓度5%、加酶量7 500U/g、温度56℃,该条件下水解度为(31.03±0.14)%。针对复合酶水解OVA功能性质的分析表明,其持水性提高了1.65g/g,持油性降低了1.05g/g,表面疏水性降低了4.05%,浊度显著性地下降。通过化学作用力、荧光光谱和扫描电镜(SEM)分析酶解对OVA结构的影响。结果表明,酶解导致蛋白质的一级结构发生了显著的变化,同时三级结构也发生了改变;此外,微观结构由球状变成片状。
- 刘丽莉陈珂李玉代晓凝孟圆圆
- 关键词：酶解物功能特性复合酶
- 卵白蛋白的分离纯化及其改性后的特性研究进展
- 卵白蛋白是蛋清中含量最高的蛋白质,是一种典型性的球状含糖蛋白质.卵白蛋白的分离纯化是研究其物理、化学及生物学性质的基础.卵白蛋白的主要功能特性有抗氧化性、起泡性、乳化性、凝胶性、持水性等.为进一步扩大卵白蛋白在食品中的应...
- 刘丽莉李玉王焕李丹杨陈柳
- 关键词：卵白蛋白改性处理抗氧化性能
- B.cereus MBL13-U产牛骨胶原蛋白酶工艺优化
- 2018年
- 为了获得能够高效降解牛骨胶原蛋白的新型胶原蛋白酶,以蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus MBL13-U)为出发菌种,以胶原蛋白酶活力为检测指标,对影响发酵的4个因素(菌种接种量、发酵温度、p H、发酵时间)进行单因素试验。通过四元二次正交旋转组合试验,确定了B.cereus MBL13-U菌株发酵制备胶原蛋白酶的最佳工艺。当菌种接种量4%(体积分数)、发酵温度35℃、初始p H6.4、发酵时间46 h时,胶原蛋白酶活力达(92.31±1.13)U/m L。将其作用于牛骨胶原蛋白,通过扫描电子显微镜对酶解过程中的牛骨胶原蛋白进行结构分析。分析结果表明:酶解破坏了牛骨胶原蛋白原本完整的表面结构,使其所含的Ⅰ型胶原蛋白更多地暴露在表面,加快水解。
- 刘丽莉李丹杨陈柳梁严予李玉
- 关键词：BACILLUSCEREUS发酵胶原蛋白酶
- 生物酶解猪骨制备多肽钙的研究
- 为综合开发利用畜禽骨资源,本文以猪骨为原材料,对生物酶解猪骨制备肽钙的方法进行研究.首先通过碱性蛋白酶进行酶解制备成胶原多肽,以水解度为指标,通过单因素和二次通用旋转试验确定了最佳酶解工艺条件为:温度为65℃、pH为8....
- 刘丽莉杨陈柳李玉梁严予李丹
- 关键词：猪骨生物酶解工艺参数
- 卵白蛋白肽的磷酸化改性工艺优化
- 2017年
- 在试验确定酶解制备卵白蛋白肽的最优工艺条件基础上,对酶解后鸡蛋清卵白蛋白肽磷酸化改性工艺进行了研究。以磷酸化程度为指标,确定最佳磷酸盐为三聚磷酸钠。通过单因素和四元二次正交旋转组合试验,研究了磷酸化工艺,确定最优工艺条件组合为:反应温度30℃、p H值8.0、反应时间4 h、三聚磷酸钠添加量(质量分数)9%,在此条件下磷酸化程度可达到(57.27±1.68)mg/g。通过紫外光谱扫描,对磷酸化改性的卵白蛋白肽进行结构变化分析。研究结果表明:磷酸化改性的卵白蛋白肽的紫外吸收峰发生了红移,卵白蛋白分子的有序二级结构减少。由于磷酸基团的嵌入,卵白蛋白肽的结构发生了变化,使得磷酸化改性后的卵白蛋白肽的紫外最大吸收峰增强。
- 刘丽莉李玉梁严予李丹杨陈柳
- 关键词：磷酸化
- 重组胶原酶Bacillus cereus ColM13的酶学及结构特性分析
- 2018年
- 以前期成功构建出降解胶原蛋白的工程菌pET30a-ColM13/BL21为出发菌,对工程菌表达纯化出的重组胶原酶(ColM13)的酶学性质进行分析。通过研究温度、pH、抑制剂对其的影响,得出ColM13的最适反应温度为50℃,最适反应pH为8.0;在20~55℃和pH6.0~9.0范围内有良好的稳定性;金属蛋白酶抑制剂乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(ethylenebis(oxyethylenenitrilo tetraacetic acid,EGTA)对ColM13有显著的抑制作用。采用紫外光谱(ultraviolet and visible spectrum,UV)、差示量热扫描(differential scanning calorimeter,DSC)、荧光光谱(FS)、傅里叶红外光谱(FT-IR)对骨胶原蛋白及其酶解产物进行结构特性分析,分析可知酶解作用使骨胶原蛋白的三股螺旋结构遭到破坏,释放出大量的游离氨基酸。酶解后胶原蛋白的肽链上-NH_2^+-相互排斥减弱,疏水氨基酸残基作用增强,具有更高的热稳定性。与B.cereus MBL13-U分离纯化出的胶原酶(BSC)相比,ColM13处理的胶原蛋白的降解效果更明显。
- 刘丽莉杨陈柳李玉梁严予孟圆圆代晓凝陈珂
- 关键词：酶学结构特性
- 酶解—磷酸化协同改性对卵白蛋白特性与结构的影响被引量：5
- 2017年
- 为考察酶解和磷酸化协同改性对卵白蛋白特性和结构的影响,针对酶解和磷酸化协同改性的卵白蛋白的功能特性变化进行分析,并通过FT-IR、DSC和SEM对协同改性的卵白蛋白结构变化进行分析。结果表明,协同改性后的卵白蛋白的溶解度、凝胶强度、乳化性较酶解后的和未改性的卵白蛋白都有较大的提高,但起泡性和泡沫稳定性有所降低;结构上,卵白蛋白因酶解导致其肽链发生断裂,使得更多的氨基酸残基暴露出来,α-螺旋和β-折叠均有所增加;协同改性的卵白蛋白热变性温度较酶解的和未改性的卵白蛋白分别升高了7.13,10.19℃;此外,由于磷酸基团的嵌入,使蛋白的结构发生了变化,分子结构由球状体变成了层叠的片状结构。
- 刘丽莉李玉王焕杨陈柳
- 关键词：卵白蛋白酶解磷酸化功能特性
- 糖基化卵白蛋白肽的制备工艺优化及特性与结构分析被引量：2
- 2018年
- 为改善鸡蛋清蛋白的加工特性,该文以卵白蛋白(ovalbumin,OVA)为研究对象,考察酶法与糖基化相结合的协同改性对其特性和结构的影响。以接枝度为指标,采用响应面法对OVA肽糖基化的工艺条件进行优化,并对改性前后OVA的功能特性和结构进行研究。结果表明,OVA肽糖基化的最佳工艺条件为pH 9、蛋白质量浓度8 g/100mL、OVA肽∶糖(质量比)为1∶1.5、反应时间4.5 h、反应温度65℃,在此条件下,糖基化接枝度为(35.67±0.74)%。协同改性后OVA的乳化活性指数较未改性OVA的提高了51.20 m^2/g,乳化稳定性提高了38.14%;起泡性和泡沫稳定性分别提高了121%,31.60%。SDS-PAGE结果表明,协同改性后OVA的分子质量由44.3 kDa变为45.0~97.2 kDa,傅里叶红外(FTIR)结果表明,协同改性后OVA的二级结构被破坏,葡聚糖连接到OVA肽上,部分红外吸收峰变强;扫描电镜(SEM)分析表明,协同改性后OVA的微观结构发生明显变化,由原来球状变成片状结构,排列更加紧密。
- 刘丽莉李玉杨陈柳梁严予代晓凝孟园园陈珂
- 关键词：卵白蛋白酶解糖基化功能性质
- 蜡样芽孢杆菌胶原蛋白酶基因的异源表达与活性分析被引量：2
- 2020年
- 研究采用降解骨胶原蛋白的蜡样芽孢杆菌MBL13-U作为原菌种,并对蜡样芽孢杆菌MBL13-U进行全基因组测序,克隆获得胶原蛋白酶(ColM13)基因。将目的基因与大肠杆菌的表达载体pET30a进行连接,转入大肠杆菌宿主菌株BL21,获得降解骨胶原蛋白的工程菌pET30a-ColM13/BL21。通过SDS-PAGE测定异源表达的重组蛋白酶ColM13的分子质量,并测定不同诱导时间和诱导浓度对ColM13酶活性的影响,最终确定重组蛋白酶ColM13的酶活最适条件:6‰异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,100 mmol/L),37℃诱导6 h,优化后酶活力最高为64.99 U/mL,较优化前提高4.24倍。通过水解圈试验、紫外光谱和扫描电子显微镜等方式验证,表明工程菌构建成功,这为我国畜禽骨骼资源的深度开发和综合利用提供了新的研究思路。
- 刘丽莉杨陈柳尤晓颜尤晓颜梁严予
- 关键词：胶原蛋白酶异源表达活性分析
