张章
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析被引量：1
- 2013年
- 目的在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体,并对其活性进行分析。方法将具有保护活性的鼠源单克隆抗体(mAb)的轻、重链可变区基因,分别与人κ型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建轻重链嵌合抗体基因,克隆到T载体上进行序列测定确证。然后分别构建含有嵌合轻、重链基因的表达载体pcDNA3.1-L和pcDNA3.1-H。构建完成的表达载体电转化CHO-S细胞,G418筛选获得稳定表达细胞株。扩大培养、收集上清用MabSelect Sure亲和层析填料纯化。纯化后的抗体进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot分析以及小鼠体内保护活性评价。结果 PCR鉴定及测序结果表明pcDNA3.1-H和pcDNA3.1-L构建完成,序列正确;Dot blot结果表明获得表达量高的稳转株细胞;SDSPAGE及Western blot法证明抗体纯化获得成功,ELISA结果表明该抗体具有结合与F1抗原的活性;小鼠体内攻击实验表明其保护活性与鼠mAb大致相同。结论成功在CHO-S细胞中表达了具有中和活性的抗F1人-鼠嵌合抗体。
- 张金龙任军于婷宋小红付广成刘树玲张章李冰李建民
- 关键词：鼠疫F1嵌合抗体中国仓鼠卵巢细胞
- 利用翻译偶联实现广谱抗病毒蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：1
- 2015年
- 目的以具有广泛助溶活性的小泛素相关修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)为辅助蛋白,利用翻译偶联,构建一种新型非融合可溶原核表达载体,实现广谱抗病毒蛋白RA在大肠杆菌中的非融合可溶表达。方法以PCR方法从酵母基因组中克隆SUMO蛋白基因smt3并进行定点突变,去除其中的EcoRⅠ酶切位点,获得同义突变体m SUMO。通过翻译偶联Linker序列的设计、合成,构建以m SUMO蛋白为辅助蛋白的翻译偶联表达载体p TIG-m SUMO。PCR扩增获得带有相应酶切位点的广谱抗病毒蛋白RA的基因,将其克隆至p TIG-m SUMO中,获得表达载体p TIG-m SUMO/RA,实现RA在大肠杆菌中的非融合可溶性表达。结果 IPTG诱导蛋白表达以后,SDSPAGE和Western印迹检测证实,目的蛋白RA的表达量明显增加,且可溶比例约占50%。结论以优化后的SUMO为辅助蛋白,成功构建了一种非融合的可溶原核表达载体p TIG-m SUMO,实现了RA蛋白在大肠杆菌中的高效非融合可溶表达,既提高了表达水平,也提高了可溶性。p TIG-m SUMO作为一种可溶的非融合表达载体,在实现外源蛋白的高效可溶表达方面,很可能具有一定的普遍性。
- 邢伶越谢德健叶丙雨张章李平沈文龙师明磊张彦赵志虎
- 关键词：可溶性非融合
- CHO细胞表达的抗炭疽保护性抗原人源化抗体的纯化及质量控制分析被引量：2
- 2014年
- 目的:建立CHO细胞表达的抗炭疽保护性抗原人源化单抗纯化工艺和质量控制方法。方法:收获50 L生物反应器中无血清悬浮培养的CHO工程细胞培养液,通过高速离心去除细胞及碎片后超滤浓缩上清液,经亲和层析、SPFF阳离子交换层析后,将所得目的蛋白质经G25凝胶柱更换缓冲液以完成纯化;对纯化的产品进行单抗鉴别(Western印迹)、相对分子质量(SDS-PAGE和MOLDI-TOF)、纯度(SEC-HPLC)、生物学活性(毒素中和试验)、产品相关杂质(SEC-HPLC检测聚集体、降解产物)、工艺相关杂质(ELISA分析残余宿主蛋白、残余蛋白A)、安全性(凝胶法检测内毒素、薄膜过滤法考察无菌)分析。结果:样品回收率达61.7%;单抗鉴别实验阳性;MOLDI-TOF测定完整分子的相对分子质量为147 995,与预期相符;单体比例为99.25%,二聚体比例为0.75%;EC50值为0.1516μg/m L。残余宿主蛋白、残余蛋白A、内毒素、无菌检查结果符合药典要求。结论:初步建立了纯化工艺和质量控制方法,为抗炭疽人源化单抗药物的研制奠定了基础。
- 张金龙李冰任军宋晓红张章侯利华于长明付玲杨秀旭李建民
- 关键词：炭疽保护性抗原人源化抗体纯化
