娄昊
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：河南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省杰出人才创新基金河南省杰出青年科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 日本三角涡虫hsp70 cDNA克隆及原核表达被引量：1
- 2010年
- 热休克蛋白70是热休克蛋白家族中的重要成员,它在保护生物体免受各种胁迫中发挥重要作用。由于其惊人的再生能力,淡水涡虫作为研究再生和发育的模式动物受到研究者关注。但是,有关涡虫抗逆性的分子机制却少有报道。研究采用RACE(Rapid amplification of cDNA end)技术首次从日本三角涡虫中克隆出hsp70(Djhsp70)全长cDNA序列。Djhsp70 cDNA全长2066bp,含有1947bp的开放阅读框,编码648个氨基酸,分子量71.18kD,GenBank登录号EU380241。DjHSP70的氨基酸含有真核生物HSP70家族蛋白的三个标签序列(9–16位的IDLGTTYS、199—206位的DLGGGTFD、334–339位的IVLVGG)和末端高度保守序列EEVD。经BLAST检索分析,Djhsp70的核苷酸序列和推定的氨基酸序列与目前已知HSP70家族成员高度同源。有趣的是,HSP70亲缘关系分析表明:涡虫更靠近脊椎动物,而与无脊椎动物果蝇和线虫相距较远。为了制备抗体研究DjHSP70的组织学定位,实验还成功构建了DjHSP70表达载体,在IPTG诱导下表达出约76kD的融合蛋白。Djhsp70 cDNA的克隆与表达载体的构建为下一步工作奠定了基础。
- 马克学陈广文娄昊费利娜
- 关键词：日本三角涡虫HSP70克隆
- 日本三角涡虫热休克蛋白70(DjHSP70)C-端多肽表达及其抗血清制备
- 2011年
- 首先运用在线生物学软件对日本三角涡虫(Degusia japonica)热休克蛋白70(DjHSP70)氨基酸序列进行亲水区分析,发现该蛋白C-端含有较多亲水性氨基酸,然后以该段多肽序列为基础构建原核表达载体。采用PCR方法扩增450 bp cDNA片段,编码DjHSP70 C-端150个氨基酸多肽。将双酶切的cDNA片段与pET-28a载体连接后导入BL21受体菌,在IPTG诱导下表达出21 ku融合蛋白,分子量与预期相符。该融合蛋白采用Ni2+-NTA agarose树脂进行纯化,纯化结果电泳检测后经灰度扫描分析显示纯度在95%以上。融合蛋白免疫新西兰大白兔获得高效价的抗血清,Western blot检测显示该抗血清不仅具有很强的特异性,而且还识别小鼠HSP70。此项工作为进一步研究淡水涡虫抗逆性奠定了基础。
- 马克学娄昊陈广文刘德增
- 关键词：涡虫蛋白纯化抗血清
- 持久饥饿对涡虫转氨酶、磷酸酶、蛋白水解酶和增殖细胞核抗原的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨持久饥饿对涡虫转氨酶、磷酸酶、蛋白水解酶和增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。方法采用全自动生化分析仪测定转氨酶的活性变化,用复性电泳技术分析磷酸酶和蛋白水解酶的变化,用半定量RT-PCR技术分析PCNA mRNA的表达变化。结果饥饿过程中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性显著升高,是对照水平的10倍以上,恢复喂食后逐渐降低到正常水平;碱性磷酸酶(ALP)的活性在饥饿过程中明显减弱,而酸性磷酸酶(ACP)活性却显著增强;受饥饿影响,140kD和40kD蛋白水解酶的活性均明显增加;然而饥饿过程中PCNA的表达没有明显变化,说明饥饿对该基因的影响很小。结论持久饥饿对涡虫的生理和生化代谢有重要影响,酶活性的变化反应了涡虫适应持久饥饿的能量代谢变化。
- 马克学陈广文娄昊刘德增
- 关键词：饥饿转氨酶磷酸酶蛋白水解酶增殖细胞核抗原涡虫
