柳伟伟
- 作品数：7 被引量：5H指数：1
- 供职机构：山西大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 基于改良石蜡切片技术的飞蝗胚胎浆膜表皮发育模式及形态变化观察被引量：1
- 2018年
- 【目的】通过优化飞蝗Locusta migratoria胚胎石蜡切片制备技术,研究飞蝗胚胎发育时期浆膜表皮变化规律。【方法】通过优化飞蝗胚胎固定前处理、洗涤、脱水和透明等步骤,改良胚胎期石蜡切片制备技术;制备飞蝗胚胎发育第3-10天的石蜡切片,通过HE染色观察浆膜表皮发育规律;通过制备飞蝗发育第6-8天从卵孔端至卵尾端的纵切切片,观察飞蝗胚胎转旋时期的形态变化。【结果】飞蝗胚胎期石蜡切片技术优化后的操作步骤为:固定前Na Cl O预处理和打孔、洗涤30min、脱水30 min和透明30 min。通过此方法可获得表皮结构完整且清晰的胚胎期组织切片。在30℃条件下,飞蝗胚胎浆膜表皮及几丁质沉积形成于胚胎发育的第5天,在第8天时开始降解。飞蝗胚胎的转旋发生在第6-7天,伴随着浆膜和浆膜表皮的形态变化。【结论】本研究优化了飞蝗胚胎石蜡切片制备步骤,揭示了飞蝗胚胎浆膜表皮及胚胎转旋的发育模式,为昆虫胚胎发育的研究提供了基础资料。
- 柳伟伟柳伟伟付穗业董卿张敏张学尧张建珍张婷婷
- 关键词：飞蝗HE染色胚胎
- RNA靶向基因组编辑技术CRISPR/Cas9在昆虫中的研究进展
- CRISPR/Cas9系统的基本结构、作用机制、脱靶效应以及在昆虫基因编辑和基因功能研究中的应用,并对该技术可能出现的问题及应用前景进行展望.对CRISPR／Cas9系统进行适当改造，将为基因功能研究提供新的思路和技术手...
- 张婷婷柳伟伟李涛张敏张学尧马恩波张建珍
- 关键词：昆虫核糖核酸
- 一种用于固定显微注射蝗虫卵的培养皿
- 本实用新型提供了一种用于固定显微注射蝗虫卵的培养皿，由长方体培养皿(1)、多个塑料隔板(2)和培养皿盖(3)组成；所述多个塑料隔板(2)，垂直均匀分布在培养皿(1)中，每一个隔板的底边和侧边分别与培养皿(1)的底部和侧壁...
- 张婷婷柳伟伟
- 文献传递
- 飞蝗胚胎期表皮发育及几丁质酶5-1功能研究
- 飞蝗Locusta migratoria胚胎期发育经历多次表皮生成与降解，其表皮降解受到几丁质酶的调控。本研究通过制备飞蝗预若虫发育时期（9d-14 d）的石蜡切片，发现飞蝗预若虫表皮在11 d开始形成，之后逐渐加厚，至...
- 柳伟伟
- 关键词：胚胎期飞蝗原核表达蛋白纯化
- 飞蝗几丁质酶5-1抗体制备及表达特性分析被引量：1
- 2018年
- 【目的】通过制备飞蝗(Locusta migratoria)几丁质酶5-1(LmCht5-1)的多克隆抗体,建立飞蝗体内LmCht5-1蛋白水平检测方法,分析LmCht5-1在4龄飞蝗的表达特性及组织定位。【方法】采用MEGA软件对LmCht5-1和LmCht5-2氨基酸序列进行比对,利用Expression网站对LmCht5-1氨基酸序列进行抗原表位预测分析,获得LmCht5-1抗原结构区域;以飞蝗c DNA为模板,通过PCR扩增LmCht5-1的抗原片段;同时通过酶切连接构建含有鸡血清白蛋白OVA的载体p ET32a-OVA;然后通过酶切连接将LmCht5-1插入到p ET32a-OVA载体构建p ET32a-OVA-LmCht5-1;将p ET32a-OVA-LmCht5-1转入表达菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导表达重组蛋白OVA-LmCht5-1;利用Ni-NTA纯化后免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。通过ELISA方法检测抗体效价;利用Western blot检测抗体特异性。提取4龄飞蝗不同日龄表皮,采用Western blot分析LmCht5-1蛋白表达模式。对4龄飞蝗注射ds LmCht5-1,检测蛋白水平LmCht5-1表达量,并通过免疫组化方法对LmCht5-1进行定位及功能分析。【结果】通过LmCht5-1和LmCht5-2序列比对和抗原表位预测分析,获得LmCht5-1的471—533AA可作为抗原区域;通过酶切连接分别获得p ET32a-OVA和p ET32a-OVA-LmCht5-1。经诱导表达和纯化后获得重组蛋白OVA-LmCht5-1,分子量为71.34 k D;免疫后制备多克隆抗体OVA-LmCht5-1,ELISA检测效价为1﹕102 400。多克隆抗体OVA-LmCht5-1用于Western blot检测时可特异性识别LmCht5-1,与LmCht5-2蛋白无交叉反应。利用Western blot方法检测4龄若虫各日龄表皮中LmCht5-1蛋白的表达,发现LmCht5-1蛋白随发育日龄其表达量逐渐增加,在蜕皮当天达到峰值,蜕皮后快速降至最低点。对飞蝗若虫N4D2注射ds LmCht5-1,检测到在N4D5时,LmCht5-1的转录水平和蛋白水平均被显著抑制,抑制率分别为70.0%和73.6%。选取注射ds LmCht5-1和ds GFP的4龄飞蝗表皮,进行免疫组化实验显示LmCht5-1定位于表皮细胞和旧表皮中,其功能失活�
- 张婷婷柳伟伟高璐李任建付穗业刘晓健李大琪李大琪刘卫敏张建珍
- 关键词：飞蝗抗体制备WESTERNBLOT
- RNA靶向基因组编辑技术CRISPR/Cas9在昆虫中的研究进展被引量：2
- 2015年
- 介绍CRISPR/Cas9系统的基本结构、作用机制、脱靶效应以及在昆虫基因编辑和基因功能研究中的应用,并对该技术可能出现的问题及应用前景进行展望,为进一步将该技术应用于非模式昆虫的基因编辑和基因功能研究提供参考.
- 张婷婷柳伟伟李涛张敏张学尧马恩波张建珍
- 关键词：基因功能
- 一种LmCas9基因与载体及其构建方法和应用
- 本发明提供了一种LmCas9基因与载体及其构建方法和应用，LmCas9基因是根据飞蝗密码子优化合成的，进一步构建的pAc?sgRNA?LmCas9载体用于基因编辑。以飞蝗LmCht5?1位点为例，通过构建其靶位点特异性的...
- 张婷婷柳伟伟高璐张学尧张建珍马恩波
- 文献传递
