姜翠翠
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程项目长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 猪Toll样受体7基因人工miRNA表达质粒的构建与筛选被引量：3
- 2013年
- 目的构建猪Toll样受体7(TLR7)基因的人工miRNA(amiRNA)特异性表达载体,筛选有效amiRNA。方法 RT-PCR扩增猪TLR7基因的1984～2648 bp序列,构建融合表达载体pTLR7-EGFP。设计针对猪TLR7的5对amiRNA,构建重组干扰质粒pcDNA5-miRTLR7。将pcDNA5-miRTLR7和pTLR7-EGFP共转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR检测amiTLR7的表达,以荧光显微镜观察和流式细胞术分析干扰效率。结果 5个amiTLR7都成功表达,且均能沉默NIH-3T3细胞中TLR7基因的表达,抑制效率为36.99%到97.28%,其中amiTLR7-3效果最佳。结论成功构建了针对猪TLR7基因的amiRNA表达质粒,筛选出了沉默猪TLR7基因的最佳干扰序列。
- 宋红芹姜翠翠孙怀昌
- 关键词：RNA干扰
- 巨噬细胞特异的人工miRNA表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 根据小RNA（microRNA,miRNA）前体分子结构特点而设计并合成的人工miRNA（artificial miRNA,amiRNA）也可以在体内通过与内源miRNA相同或相似的途径发挥RNA干扰（RNA interference,RNAi）作用,目前amiRNA技术在调控基因表达、抗病毒领域得到了广泛应用[1-4]。
- 宋红芹姜翠翠张鑫宇夏晓莉孙怀昌
- 关键词：巨噬细胞
- 非洲猪瘟病毒NP419L基因shRNA表达质粒的构建与筛选被引量：6
- 2013年
- 为构建非洲猪瘟病毒(ASFV)shRNA表达质粒,以PCR扩增出非洲猪瘟病毒NP419L基因,并插入真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组真核表达质粒pNP419L-GFP,将其转染NIH-3T3细胞,NP419L-GFP融合基因在细胞中获得表达。针对NP419L基因设计并合成5对干扰序列,将其连接到RNAi表达载体pSuper中,构建干扰质粒pSuper-shNP419L-A,B,C,D,E,将质粒pNP419L-GFP和pSu-per-shNP419L-A,B,C,D,E分别共转染NIH-3T3细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞仪分析干扰效率。结果显示,5个干扰质粒均能抑制NIH-3T3细胞中NP419L-GFP融合基因的表达,其中pSuper-shNP419L-A,B的抑制效果较好,在87%以上,与pSuper-shNP419L-C,D,E之间均存在显著性差异(P<0.05)。表明,本试验成功构建出针对ASFV NP419L基因的RNA干扰质粒,并筛选出了有效沉默NP419L基因的干扰序列,为进一步体内试验研究奠定了基础。
- 宋红芹姜翠翠张鑫宇夏晓莉孙怀昌
- 关键词：非洲猪瘟病毒RNA干扰
- 巨噬细胞特异性真核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:克隆人清道夫受体A(SR-A)启动子,构建巨噬细胞特异性的真核表达载体。方法:从人外周血中提取基因组DNA,采用PCR技术分别扩增人SR-A的启动子及第一内含子和增强子序列,并插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pcDNA-GFP中,构建巨噬细胞特异性表达载体pSRA-GFP。将pSRA-GFP转染巨噬细胞和非巨噬细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞术比较GFP在不同细胞中的表达水平。结果:成功克隆SR-A启动子,其在巨噬细胞RAW264.7中的表达活性显著高于NRK、LLC、Hepa1-6等非巨噬细胞株(P<0.05)。结论:构建的表达载体pSRA-GFP具有良好的组织细胞特异性,可用于巨噬细胞特异性miRNA表达载体的构建。
- 宋红芹尹莉姜翠翠张鑫宇夏晓莉孙怀昌
