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小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及饲养层制备被引量：10: 2014年; 背景:建立一种既可以大量制备,又易于保存并保持较高活性的饲养层细胞是人胚胎干细胞培养研究的重要环节。目的:建立昆明小鼠胚胎成纤维细胞的最佳分离培养方法,评价其用于人胚胎干细胞饲养层研究的可行性。方法:用不同浓度胰蛋白酶分步消化法体外分离和培养昆明小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性,制备胚胎成纤维细胞饲养层,检测人胚胎干细胞在饲养层上培养的生长状态。结果与结论:制备昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄为13.5 d。不同浓度胰蛋白酶分步消化法制备的胚胎成纤维细胞生长状态好,获得的成纤维细胞纯度高,增殖活跃。冻存2周,1,3,6个月内复苏的细胞存活率差异无显著性意义。小鼠胚胎成纤维细胞在第2-4代增殖旺盛,第5代以后细胞增殖活力明显下降。人胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞长期传代后呈典型的未分化形态,碱性磷酸酶和过碘酸-雪夫染色均为阳性。结果表明建立的昆明小鼠胚胎成纤维细胞饲养层分离培养法可为人胚胎干细胞扩增提供稳定、优质的饲养层细胞。; 胡三强王妍妍马永宾胡嘉波; 关键词：干细胞人胚胎干细胞小鼠胚胎成纤维细胞饲养层国家自然科学基金

SJMHE1多肽在治疗周围神经损伤药物中的用途: 本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种SJMHE1多肽在治疗周围神经损伤药物中的用途。本发明证实SJMHE1多肽可以明显提高周围神经损伤动物模型中大鼠坐骨神经功能恢复能力，促进坐骨神经的再生，对大鼠坐骨神经轴突的再生、...; 汪雪峰马永宾董利阳; 文献传递

大鼠骨髓间充质干细胞促进RSC96细胞凋亡并抑制其增殖和迁移被引量：3: 2017年; 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠RSC96施万细胞增殖及迁移的影响。方法全骨髓细胞贴壁法分离并提取SD大鼠BMSC,倒置显微镜观察第3代BMSC形态;流式细胞术检测细胞表面CD19、CD34、CD73、CD105;第3代BMSC经成脂成骨诱导液分别诱导3周和2周后,分别应用油红O染色和碱性磷酸酶检测BMSC的多向分化能力。应用24 mm共培养板,将第3代BMSC与RSC96细胞共培养24 h,采用MTT法和平板克隆形成实验检测RSC96细胞增殖及克隆形成能力;划痕实验及TranswellTM小室实验检测RSC96细胞的迁移能力;Western blot法检测RSC96细胞Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果SD大鼠第3代BMSC显微镜下呈梭形、旋涡状排列,形态大小相似;BMSC表面标志CD73、CD105高表达,造血干细胞表面标志CD34和淋巴细胞表面标志CD19低表达;BMSC经成脂诱导培养3周后,细胞有大量脂滴;经成骨诱导培养2周后,碱性磷酸酶染色呈阳性;BMSC与RSC96细胞共培养后,与对照组相比,RSC96细胞的增殖活性显著降低,克隆形成能力显著减弱、细胞迁移能力降低;共培养后RSC96细胞Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白表达降低。结论 BMSC能促进RSC96细胞凋亡,抑制其增殖、迁移。; 马永宾葛锁华周丹张欢妍孙露阳汪雪峰苏建华; 关键词：骨髓间充质干细胞增殖迁移

大鼠骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡分离和鉴定被引量：5: 2017年; 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡(BMSC-EV)的分离、鉴定及-80℃冻存对BMSC-EV膜结构完整性的影响。方法应用超高速离心法从大鼠BMSC培养上清液(BMSC-CS)中分离并纯化EV,扫描电镜和透射电镜观察其大小和形态;Western blot法检测EV标志性蛋白CD63的表达;-80℃冻存后,不同时间段通过透射电镜观察EV膜结构的完整性。结果扫描电镜观察BMSC表面附着有大量膜结构的EV,形态呈圆形或椭圆形,直径约50~1000 nm;透射电镜观察BMSC-EV具有膜结构,形态和大小与扫描电镜结果一致;Western blot结果表明,BMSC-EV表达CD63;-80℃冻存后,在第1个月和第3个月分别通过透射电镜观察BMSC-EV膜结构完整,而冻存第6个月BMSC-EV膜结构破裂。结论成功提取了BMSC-EV,且随着冻存时间的延长,其膜结构完整性降低。; 葛锁华马永宾芮星张俊华汪雪峰苏建华; 关键词：骨髓间充质干细胞

胞外囊泡作为药物传递天然纳米载体的研究进展被引量：5: 2017年; 细胞释放膦脂膜的小囊泡在细胞交流、抗原递呈、感染物的传递等方面起关键作用。胞外小囊泡携带各种蛋白、mRNA、microRNA(miRNA),象一个卡车运载"货物"一样,将携带的各种分子运载至远端的细胞。而且,被小囊泡包裹的分子可避免被体液中的酶降解,使胞外囊泡成为天然的、新颖的药物传递系统。该文综述了胞外囊泡的分类、组成、生物药物应用、以及作为药物传递载体在临床实验应用等方面的研究进展,为寻求新的药物传递系统治疗相关疾病提供理论基础。; 张欢妍汪雪峰马永宾李莉舒扬汪毅; 关键词：药物传递免疫治疗

大鼠骨髓间充质干细胞培养上清液对RSC96细胞生物学功能的影响: 2017年; 目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)培养上清液对大鼠RSC96细胞生物学功能的影响。方法:体外培养、纯化SD大鼠BMSC并进行鉴定;收集第3代BMSC培养上清液(BMSC-CM);采用MTT法检测BMSC-CM对RSC96细胞增殖的影响;平板克隆实验分析BMSC-CM对RSC96单个细胞增殖的影响;划痕实验和TranswellTM小室实验分析BMSC-CM对RSC96细胞迁移的作用,Western blot法检测BMSC-CM对RSC96细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的改变。结果:SD大鼠第3代BMSC形态呈长梭形,旋涡样生长;成骨染色为阳性结果;成脂诱导后有脂滴出现;BMSC-CM作用后抑制RSC96细胞的增殖和迁移能力,且作用后的RSC96细胞Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白表达降低。结论:BMSC-CM促进RSC96细胞凋亡,抑制其增殖和迁移。; 马永宾葛锁华汪雪峰苏建华; 关键词：骨髓间充质干细胞增殖迁移

SJMHE1多肽在治疗周围神经损伤药物中的用途: 本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种SJMHE1多肽在治疗周围神经损伤药物中的用途。本发明证实SJMHE1多肽可以明显提高周围神经损伤动物模型中大鼠坐骨神经功能恢复能力，促进坐骨神经的再生，对大鼠坐骨神经轴突的再生、...; 汪雪峰马永宾董利阳; 文献传递

一种简便、高效的巨噬细胞迁移体分离方法: 本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种简便、高效的巨噬细胞迁移体分离方法。本发明采用滤器过滤截留迁移体并通过反向过滤、洗脱的方式成功分离直径范围在0.5‑3μm之间的迁移体。本发明成功从RAW264.7细胞中分离出具有...; 汪雪峰马永宾

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马永宾