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郭静远: 作品数：27 被引量：58H指数：5; 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>; 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项海南省自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>

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番木瓜干旱胁迫相关CpDHN基因的克隆与原核表达被引量：3: 2020年; 本研究基于转录组获得的CpDHN转录本序列,以番木瓜‘台农二号’组培苗叶片为材料,采用RT-PCR技术克隆了该基因包含完整ORF在内的425 bp cDNA序列。序列分析表明,CpDHN预测编码93个氨基酸,其理论分子量为10.50 kDa、等电点为6.62、总平均疏水指数为-1.984、核定位。除保守的K片段外,蛋白还含有1个S片段,可归为KS型脱水素。在拟南芥中的10个脱水素中,CpDHN与AtLEA8的亲缘关系最近,相似性为53.3%。值得注意的是,虽然CpDHN的编码区不存在内含子,但其3’UTR含有1个与AtLEA8类似的内含子。表达谱分析显示,该基因在根和叶片中均受干旱胁迫诱导。此外,还构建了CpDHN的原核表达载体,SDS-PAGE分析显示,该蛋白在大肠杆菌中可高效表达。这些结果为下一步的功能鉴定奠定了坚实的基础。; 郭静远郭静远孔华孔华郭运玲; 关键词：番木瓜脱水素基因克隆原核表达

狗尾草响应不同干旱及盐胁迫表达的荧光定量内参基因Actin及其应用: 本发明公开了一种狗尾草响应不同干旱及盐胁迫表达的荧光定量内参基因Actin及其应用。本发明的应用扩增得到的Actin PCR产物大小适中，容易判定：狗尾草基因组响应不同干旱及盐胁迫条件下的基因表达内标基因肌动蛋白基因PC...; 张丽丽郭安平郭静远赵辉霍姗姗贺萍萍夏启玉王绪朋屈静

2个14-3-3蛋白基因在香蕉果实成熟过程中的表达分析被引量：1: 2018年; 通过简并引物和降落PCR方法结合RACE(rapid amplification of c DNA end)技术在香蕉果实c DNA文库中获得2个14-3-3基因,分别命名为Ma14-3-3d和Ma14-3-3h,把Ma14-3-3d和Ma14-3-3h与Ma14-3-3a、Ma14-3-3c、Ma14-3-3e、Ma14-3-3i进行多重序列比对和同源性比较。结果表明:Ma14-3-3d和Ma14-3-3h与Ma14-3-3a、Ma14-3-3c、Ma14-3-3e、Ma14-3-3i具有较高的同源性,同时具有一定的差异性。遗传进化分析结果表明,Ma14-3-3d与Ma14-3-3a、Ma14-3-3c、Ma14-3-3e、Ma14-3-3i同属于non-ε类14-3-3基因,Ma14-3-3h属于ε类14-3-3基因。RT-PCR分析结果表明,Ma14-3-3d和Ma14-3-3h在香蕉不同器官中差异表达,Ma14-3-3d在香蕉的根、茎、叶、花和果中均有表达,且在茎、叶和花中的表达量高于根和果;Ma14-3-3h在根、花和果中的表达量较高,而在茎和叶中的表达量较低。q RT-PCR分析结果表明,Ma14-3-3d基因的表达明显受乙烯的诱导,而Ma14-3-3h在正常成熟、乙烯处理与1-MCP处理的果实中表达量均很低,与果实成熟的相关性不明显。推测Ma14-3-3d可能与香蕉果实成熟密切相关,可能参与乙烯调控果实成熟过程中的生物合成与信号转导。; 李美英金志强杨小亮贾彩虹夏启玉郭静远贺萍萍徐碧玉; 关键词：香蕉

甘露醇胁迫下模式植物狗尾草种子萌发期抗旱性鉴定与评价指标研究被引量：5: 2017年; 狗尾草是一种新型的模式植物,符合作为模式植物的所有要求,是C4光合作用的优秀模型,也是研究非生物胁迫耐受性很好的模型。在狗尾草高效遗传转化技术的基础上,以适宜转化的狗尾草ME34品系非转基因成熟种子为外植体,根据甘露醇高渗培养基培养法,设计了0、200、300、400、500、600 mmol/L 6个梯度,对狗尾草ME34品系种子萌发期的抗旱性进行了鉴定。结果表明:甘露醇200~300 mmol/L的梯度是鉴定狗尾草ME34品系抗旱性的关键梯度,种子萌发期发芽率、鲜重、根长、芽长等各项生长指标都受到显著或极显著的影响,各生长指标对甘露醇干旱胁迫的敏感性依次为鲜重>根长>芽长>发芽率,参数间两两显著或极显著正相关;鲜重对甘露醇的胁迫的反应最敏感和直接,在200 mmol/L梯度下已表现为极显著降低,可作为该品系种子萌发期抗旱性鉴定的一级指标;根长对甘露醇梯度的反应是低浓度促进根的生长,高浓度抑制根的生长,极显著促进生长的梯度(200 mmol/L)适合用作鉴定依据,此外,芽长对甘露醇也敏感,200、300 mmol/L分别显著和极显著抑制芽长,根长和芽长可作为该品系种子萌发期抗旱性鉴定的二级指标;种子发芽率对甘露醇的敏感性稍弱,200 mmol/L条件下发芽率变化不明显,在300 mmol/L条件下才表现为极显著下降,可作为该品系种子萌发期抗旱性鉴定的三级指标。实验为狗尾草作为抗旱模式植物的研究准备了抗旱性评价指标基础,无论是外源抗旱基因在狗尾草内的过表达,还是内源抗旱基因的敲除,都需要这些具体评价指标的支撑。; 赵辉张丽丽郭静远霍姗姗贺萍萍夏启玉符冬妹郭安平; 关键词：狗尾草萌发期抗旱性鉴定

基于RNAi抗PRSV番木瓜株系的培育及其分子特征验证被引量：5: 2017年; 根据RNAi原理构建的抗海南番木瓜环斑病毒(PRSV)植物表达载体p CAMBIA2300-35S-CP-RNAi-OCS,通过基因枪法将载体导入番木瓜的愈伤组织中,经卡那霉素抗性筛选后再分化成为植株。描述转化植株的分子特征同时进行抗病毒试验分析其抗病性。实验结果显示:转基因株系474为单拷贝插入的杂合子,插入位点在第7号染色体supercontig_61的717 141位置;抗病毒试验中,在接种病毒后28 d内非转基因株系1280有高浓度的病毒积累并很快表现出明显的病症,而转基因株系474基本无病毒积累且无发病症状。表明转基因株系474具有较好的PRSV抗性,有待于进一步田间试验。; 黄静贾瑞宗孔华郭静远王绪朋郭安平; 关键词：番木瓜环斑病毒番木瓜 RNAI

提高PRSV抗病育种高效性和广谱性的基因及编辑方法: 本发明公开了一种提高PRSV抗病育种高效性和广谱性的基因及编辑方法，基因编辑方法包括以下步骤：(1)根据抗病育种范围，从PRSV的关键基因入手，根据株系地理来源，建立这些基因的基因库；(2)对基因库内的序列进行同源性和聚...; 赵辉郭安平王绪鹏贺萍萍张雨良郭静远; 文献传递

木薯淀粉分支酶活性测定方法比较研究被引量：2: 2016年; 旨在找到木薯淀粉分支酶活性有效测定方法。以成熟期的木薯块根为材料,对现有的淀粉分支酶活性测定方法从酶液提取液、酶液浓度、反应体系、反应时间和酶反应终止方式作了比较和改进。木薯淀粉分支酶活性测定的有效方法:取0.5 g成熟木薯块根,加入提取液研磨成浆,离心后上清为粗酶液,粗酶液稀释后加0.5%可溶性淀粉,37℃恒温水浴中保温10 min后置沸水浴中终止反应,再加碘液显色反应10 min后测定波长660 nm处吸光度值,每降低一个百分率的碘蓝值即为木薯淀粉分支酶SBE的一个活性单位(U)。改良后的淀粉分支酶活性测定方法能很好的区分木薯不同株系淀粉分支酶活性差异,实验重复性好,操作简单、快捷。; 郭运玲孔华左娇黄启星贾瑞宗郭静远周霞郭安平; 关键词：木薯淀粉分支酶活性

油莎豆块茎油脂积累相关基因CeWRI1的克隆与功能分析被引量：5: 2022年; 起源于非洲的油莎豆是迄今唯一已知在块茎中高水平积累油脂的新型草本油料作物。基于我国当前食用植物油和生物柴油原料供给紧张的局面,挖掘参与油莎豆块茎油脂积累的关键基因具有重要的理论意义和应用价值。WRI1(WRINKLED1)隶属于AP2/ERF转录因子家族,是一类被证实在油料种子发育过程中控制碳源由糖向油分配的关键基因。本研究采用RT-PCR技术从油莎豆的块茎中分离到一个WRI1同源基因(CeWRI1),该基因的编码区为1116 bp,预测编码371 AA,其理论分子量为41.58 kDa,等电点为5.76,总平均疏水指数为–0.750,不稳定系数为60.75,细胞核定位,这与其转录调控功能是一致的。与拟南芥WRI1类似,序列分析显示CeWRI1含有2个保守的AP2结构域(PF00847)、1个VYL基序和1个14-3-3/BPM结合基序;相比AP2结构域和N端,其C端序列的变异较大,但包含与蛋白降解相关的PEST基序。qRT-PCR分析显示,CeWRI1在叶片、叶鞘、根、匍匐茎和块茎等主要组织中都有表达,且其在起始期、膨大初期、膨大中期、膨大晚期和成熟期等不同发育时期块茎中呈现先降后升的J型表达趋势,表达丰度最高的为成熟期,最低是膨大中期,这与油脂的积累模式大体一致。在烟草中的功能分析显示,CeWRI1的异源瞬时过表达可显著提高叶片的油脂(甘油三酯)含量,这进一步证实该基因具有油脂调控功能。上述结果表明CeWRI1是调控油莎豆块茎高水平积累油脂的关键基因之一,这不仅为进一步揭示油莎豆块茎油脂积累的调控机制奠定了坚实的基础,也为后期的品种改良提供了宝贵的基因资源。; 徐硕邹智肖艳华张丽孔华孔华郭安平; 关键词：甘油三酯 QRT-PCR

番木瓜镁离子转运蛋白基因CpMGT1的克隆与功能分析被引量：2: 2022年; 镁是一种大量金属营养元素,其在植物的生长、发育、光合、胁迫响应等生物学过程中起重要作用。在高等植物中,Mg;的吸收、运输、分布和再分配主要由镁离子转运蛋白(MGT/MRS2)和Mg;/H;交换体(MHX)介导。其中,MGT/MRS2又名CorA,最先在鼠伤寒沙门氏菌中被发现,后在拟南芥、水稻等模式植物中进行了较为深入的研究。番木瓜(Carica papaya L.)是一种隶属于十字花目番木瓜科的重要热带果树,至今还未见有关MGT基因的报道。本研究基于番木瓜的基因组和转录组数据,采用RT-PCR技术成功克隆到一个MGT基因(CpMGT1),应用生物信息学手段预测蛋白的理化特性和保守基序,运用qRT-PCR分析基因的表达模式,利用缺失CorA、MgtA和MgtB的沙门氏菌突变株MM281进行功能互补。结果表明:CpMGT1的编码区为1332 bp,预测编码443 aa,理论分子量为50.43 kDa、等电点为5.12;该蛋白含有2个疏水跨膜区(TM1和TM2),其中TM1包含高度保守的GMN基序;进化及亚细胞定位分析表明CpMGT1与拟南芥中AtMGT1和AtMGT2的亲缘关系较近,定位于细胞膜;定量分析显示CpMGT1基因为组成型表达,其中在根、茎和果实中的表达量较高;在MM281中异源表达可显著提高工程菌在低Mg;浓度下的生长速率,表明CpMGT1具有高效的Mg;转运活性。CpMGT1的克隆与鉴定为进一步揭示番木瓜MGT基因在不同组织特别是在果实中Mg;的积累机制奠定了坚实的基础。; 许迎港邹智郭静远郭静远朱国鹏孔华; 关键词：番木瓜沙门氏菌

双波长法测定木薯的直链和支链淀粉含量被引量：15: 2016年; 直链淀粉和支链淀粉含量及其比例是木薯淀粉品质的重要指标。采用双波长法对30个木薯株系的直、支链淀粉的含量进行了测定,根据碘分别与直链和支链淀粉反应生成复合物的吸收光谱,我们最后确定了直链淀粉的和支链淀粉的参比波长和测定波长分别是609和469.5 nm、542和721 nm。根据回归方程得到了30个木薯株系的直链淀粉和支链淀粉的含量。本实验中用于测定木薯的直链淀粉浓度在0～26μg/m L,支链淀粉浓度在0～100μg/m L范围内符合比耳定律。结果表明：SC8不同株系的直链淀粉含量变化范围：14.879%～21.905%,支链淀粉含量变化范围：47.864%～56.955%;SC6不同株系的直链淀粉含量变化范围：15.494%～24.726%,支链淀粉含量变化范围44.292%～57.465%。该方法准确性高、重复性好、效率高,工作量小,适于批量木薯样品分析。; 郭运玲孔华左娇贾瑞宗黄启星郭静远周霞郭安平; 关键词：木薯双波长法直链淀粉支链淀粉

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