李捷
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国农业大学农学与生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学理学医药卫生更多>>
- 葡萄卷叶伴随病毒1号河北和辽宁分离物CP基因序列分析被引量：4
- 2012年
- 为获得葡萄卷叶伴随病毒1号(Grapevine leafroll-associated virus 1,GLRaV-1)中国分离物的分子信息,提高其检测可靠性,本研究从河北怀来和辽宁兴城地区带有明显卷叶症状的葡萄样品中提取的叶柄韧皮部总RNA,采用RT-PCR克隆了GLRaV-1的河北(GLRaV-1-HB)和辽宁分离物(GLRaV-1-LN)的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因,并进行了序列分析。结果表明:GLRaV-1-HB和GLRaV-1-LN的CP基因核苷酸同源性为90.7%,由此推导的氨基酸同源性为93.8%;与已报道的国外3个GLRaV-1分离物的CP基因全序列相比,其核苷酸与氨基酸序列同源性分别为90.0%～96.0%和92.9%～97.5%。以CP基因序列构建的进化树表明,现有的5个分离物可分为3组,其中本研究得到的GLRaV-1-HB和GLRaV-1-LN,分别与巴西分离物(GLRaV-1-PS,GenBank登录号为GQ332536.1)和伊朗分离物(GLRaV-1-IR-S7,FJ952151.2)为一组;澳大利亚分离物(GLRaV-1-AUS,AF195822.1)单独为一组。
- 刘命华王克双齐洪华吕睦頔李捷程玉琴范在丰
- 关键词：葡萄卷叶病RT-PCR进化树
- 南瓜蚜传黄化病毒P0蛋白基因ihpRNA载体构建及烟草转化被引量：3
- 2012年
- P0蛋白是南瓜蚜传黄化病毒基因组编码的基因沉默抑制子。根据已克隆的CABYV P0蛋白基因序列,设计带酶切位点的特异性引物,PCR扩增用于构建RNAi表达载体的P0蛋白基因正反义片段。将正反义片段分别插入到含有内含子的中间载体pBSint上,得到重组的中间载体pBSint-P0-F-R。用Sal I和Sac I双酶切pBSint-P0-F-R,将切下的包括内含子和正反义P0蛋白基因在内的片段定向克隆到植物表达载体pCambia1300上,得到含有发卡结构的RNAi表达载体pCambia-P0-F-R。通过农杆菌介导的方法将该表达载体转化本生烟,经PCR检测,得到4株阳性转基因植株。为设计出更广谱、特异有效的抗病毒策略及研究病毒蛋白的功能特性及其侵染机制提供实验材料。
- 齐洪华李捷马萱徐践
- 关键词：RNA干扰抑制子
- 葡萄卷叶伴随病毒3号外壳蛋白基因的原核表达和抗血清制备
- 利用特异性引物扩增得到了葡萄卷叶伴随病毒3号(Grapevine leafroll-associated virus3,GLRaV-3)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并将其定向克隆到原核表达载体pET...
- 费菲王克双吕睦廸李捷程玉琴
- 葡萄卷叶伴随病毒3号抗血清的制备及应用被引量：2
- 2012年
- 为获得特异性抗血清用于批量检测葡萄苗木中的葡萄卷叶伴随病毒3号(Grapevine leafroll associatedvirus 3,GLRaV-3),本研究用含有GLRaV-3CP蛋白基因的载体pMD18-CP为模板,PCR扩增CP蛋白基因。将PCR产物定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选得到阳性克隆pET-G3CP。用终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,GLRaV-3CP在大肠杆菌中得到高效表达。纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。经分析,抗血清效价为1/214,试验结果显示,此抗血清能用于葡萄植株样品中GLRaV-3不同分离物检测。
- 王克双费菲吕睦頔李捷程玉琴
- 关键词：WESTERNBLOT分离物
- 3种葡萄卷叶伴随病毒RT-PCR检测被引量：2
- 2012年
- 2010—2011年我们对河北省涿鹿、怀来、昌黎、宣化等县(区)以及北京市葡萄卷叶病的发生情况进行了调查,并对采集的葡萄植株样品用RT-PCR方法检测病毒种类。在检测的82个样品中,葡萄卷叶伴随病毒3号(GLRaV-3)的检出率为100.0%,葡萄卷叶伴随病毒1号(GLRaV-1)的检出率为17.1%,葡萄卷叶伴随病毒2号(GLRaV-2)的检出率为11.0%;病毒混合侵染的样品占总检测样品数的28.1%,其中葡萄卷叶伴随病毒1号、3号混合侵染样品占总检测样品数的17.1%,葡萄卷叶伴随病毒2号、3号混合侵染的样品占总检测样品数的11.0%,且在这些被病毒混合侵染的样品中,有2个样品被葡萄卷叶伴随病毒1号、2号、3号三重侵染。
- 王仲刘命华李捷李明骏程玉琴
- 关键词：葡萄卷叶病RT-PCR
- 葡萄卷叶伴随病毒2号p24蛋白基因转化烟草的研究
- 2013年
- 以含有葡萄卷叶伴随病毒2号(Grapevine leafroll-associated virus 2,GLRaV-2)p24蛋白基因的T载体(p-G2-p24)为模板,PCR扩增该蛋白基因的全长序列及其5′端长300bp的正反向片段。将p24蛋白基因全长序列定向克隆到表达载体pCsuper 1300+上,得到重组质粒pCsuper1300-p24。将正反向片段先后插入具内含子的中间载体pBSint上,得到重组的中间载体pBSint-p24-F-R。然后用HindⅢ和SacⅠ双酶切pBSint-p24-F-R,将切下的带内含子的正反向串联片段定向克隆到植物表达载体pCsuper 1300+上,得到含有发夹结构的RNAi重组质粒pCsuper-p24-F-R。将pSuper1300-p24和pCsuper-p24-F-R分别通过农杆菌浸润叶盘法转化本生烟。经过RTPCR和PCR检测,分别获得了异源表达p24的T0和T1代阳性株系各34和12个,转化pCsuper-p24-F-R的T0和T1代阳性株系各17和7个。该结果可为p24功能研究及培育RNAi介导的抗病毒葡萄新种质提供试验材料。
- 李捷程玉琴
- 关键词：葡萄异源表达RNA干扰RNA沉默抑制子
