李姗姗
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：东北农业大学食品学院乳品科学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 脂肪酸结合蛋白5对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的影响被引量：2
- 2017年
- 脂肪酸结合蛋白5(fatty acid binding protein 5,FABP5)是一种胞内脂质运载体。本试验应用甘油三酯测定法及BODIPY染色法检测奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)中甘油三酯及脂滴分泌情况,采用实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测BMECs中FABP5对固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达影响。结果显示,试验成功获得高纯度的BMECs,构建了pGCMV-IRES-EGFP-FABP5真核表达载体,且与空白对照组和空载体组相比,FABP5过表达组的甘油三酯和脂滴分泌量极显著增加(P<0.01),同时SREBP-1c及靶基因FAS、ACC的表达量均极显著增加(P<0.01);试验成功筛选了FABP5siRNA1为最佳干扰片段,当FABP5抑制时,抑制组的甘油三酯、脂滴分泌量极显著减少(P<0.01),SREBP-1c、FAS、ACC的表达量均极显著降低(P<0.01)。表明FABP5可通过上调SREBP-1c的表达从而促进BMEC中乳脂的合成。
- 于萌萌李萌李姗姗李冬高学军
- 关键词：奶牛乳腺上皮细胞固醇调节元件结合蛋白-1C乳脂
- 牛mettl3基因的原核表达与蛋白纯化被引量：1
- 2017年
- m^6A甲基转移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)可调控m RNA的m6A甲基化水平,调节细胞蛋白质合成,实验室前期发现METTL3为乳腺上皮细胞乳合成重要调节分子,发挥泌乳调节作用。目前尚不清楚METTL3分子结构基础及其参与的调节机制。为揭示METTL3结构与功能关系,对METTL3蛋白作原核表达及纯化。研究采用PCR方法扩增牛mettl3基因完整CDS区,将CDS区插入原核表达载体p GEX-4T-1,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导METTL3蛋白大量表达,用8 mol·L-1尿素裂解包涵体,利用GST蛋白纯化试剂盒纯化诱导获得METTL3蛋白。SDS-PAGE证实GST-METTL3融合蛋白存在于包涵体内,试验获得高纯度GST-METTL3融合蛋白,为进一步研究METTL3蛋白在奶牛泌乳中作用提供重要依据。
- 高学军刘丽杰李冬李姗姗陈东莹于萌萌
- 关键词：原核表达纯化
- 牛乳腺上皮细胞中氨基酸激活甘氨酰-tRNA合成酶的信号通路
- 氨酰-tRNA合成酶是蛋白质合成过程中的一类关键酶，具有氨酰化的经典功能。近年来研究发现，氨基酰tRNA合成酶家族的许多成员能够在基因表达的调控、促进血管生成、炎症反应的发生等生命活动中起重要作用。这些研究结果提示我们，...
- 李姗姗
- 关键词：氨酰TRNA合成酶奶牛乳腺上皮细胞信号通路
- 牛NF-κB1基因的原核表达与蛋白纯化被引量：1
- 2016年
- NF-κB1是一类重要核转录因子,参与多种基因表达调控。NF-κB1能与奶牛乳腺中乳合成调控相关基因结合,发挥泌乳调节作用。研究应用PCR方法扩增奶牛NF-κB1基因编码序列,通过Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-1载体中,构建原核表达重组质粒p GEX-4T-1-NF-κB1,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)。经酶切和测序鉴定正确后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)大量诱导表达,8 mol·L^(-1)尿素裂解包涵体,裂解后上清经GST-Sepharose 4B亲和纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果表明,原核表达载体p GEX-4T-1-NF-κB1构建成功,SDS-PAGE证实NF-κB1融合蛋白存在于包涵体内,纯化后得到GST-NF-κB1融合蛋白,为进一步研究NF-κB1蛋白在奶牛泌乳中作用提供试验依据。
- 高学军李姗姗于萌萌李冬
- 关键词：奶牛克隆原核表达纯化
- METTL3对乳腺上皮细胞中乳蛋白和乳脂肪合成的影响被引量：3
- 2017年
- 本试验旨在研究m6 A甲基转移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)在奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)中对乳蛋白和乳脂肪的调节作用。试验建立不同的BMEC模型,应用Western blotting、免疫荧光法检测添加雌激素(E)、蛋氨酸(Met)、METTL3超表达和抑制时对BMEC中乳蛋白和乳脂的影响,以及基因定位和表达变化。结果显示,当在BMEC培养液中添加E、Met及METTL3表达水平提高时,mTOR、p-mTOR、GlyRS、p-GlyRS、CSN2、SREBP-1c等表达量均增加,反之,这些基因表达量均下降,表明METTL3可以通过调控乳脂、乳蛋白的相关信号通路分子的基因表达进而影响乳脂、乳蛋白的表达。提示METTL3是乳合成的重要调节分子,可对细胞中乳脂、乳蛋白的合成起正调控作用。
- 李冬黄鑫李姗姗于萌萌李萌张明辉高学军
- 关键词：M6奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪乳蛋白
