李冬辉
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
- 供职机构：南通大学公共卫生学院江苏省神经再生重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多疣壁虎血管活性肠肽基因的克隆及表达
- 2012年
- 目的:克隆多疣壁虎血管活性肠肽(VIP)的cDNA全长序列,研究VIP在正常壁虎各组织中的表达及断尾损伤后脊髓再生过程中的表达变化。方法:通过对多疣壁虎断尾损伤cDNA文库克隆测序获得VIP基因序列。通过Northern blot验证VIP转录本的大小,通过原位杂交检测VIP mRNA在正常壁虎脊髓中的分布。制备壁虎断尾损伤模型,通过采用Real time-PCR和原位杂交的方法检测VIP mRNA在壁虎损伤模型断端近侧脊髓中的表达变化。结果:VIP mRNA全长1933 bp,编码156个氨基酸的前原蛋白。编码的成熟肽与其他物种的同源性约为82.1%。RT-PCR和Northern blot显示VIP在正常壁虎组织中广泛表达,且通过Northern blot发现正常壁虎体内只一个转录本,大小约1.9kb。原位杂交结果显示VIP阳性信号主要分布于脊髓灰质中,白质中仅有少量表达。Real-time PCR和原位杂交结果表明断尾损伤后的近端脊髓组织中VIP表达呈动态变化。结论:获得壁虎VIP全长mRNA序列的基本特征及其多组织表达图谱。VIP在壁虎的脊髓中主要分布于灰质中,壁虎在断尾损伤后近端脊髓VIP的表达呈动态变化。
- 钱玉燕李冬辉张加吉刘梅刘炎
- 关键词：血管活性肠肽壁虎脊髓实时定量聚合酶链反应
- 壁虎骨骼肌卫星细胞的原代培养与鉴定被引量：7
- 2011年
- 目的:建立一种有效的壁虎骨骼肌卫星细胞分离、培养及鉴定体系。方法:取壁虎后肢肌,采用I型胶原酶消化法获得细胞悬液,经差速贴壁法纯化骨骼肌卫星细胞,通过Pax7免疫细胞化学方法鉴定骨骼肌卫星细胞。用此法也分离到小鼠骨骼肌卫星细胞。结果:(1)分离到的细胞呈小圆形,培养2天后可见纺锤形细胞。(2)免疫细胞化学染色显示,分离得到的壁虎骨骼肌卫星细胞表达Pax7。Pax7阳性的小鼠骨骼肌卫星细胞达99%以上。培养3天后卫星细胞开始增殖。结论:成功建立壁虎骨骼肌卫星细胞的纯化和鉴定方法,为进一步研究卫星细胞在高等哺乳动物损伤修复中的可塑性奠定基础。
- 徐青徐敏张加吉李冬辉刘炎
- 关键词：骨骼肌卫星细胞原代培养差速贴壁法壁虎
