季晓飞
- 作品数：19 被引量：36H指数：4
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- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 与细菌抗原检测相关的虚拟仿真综合实验建设与应用
- 2023年
- 目的 设计与细菌抗原检测相关的虚拟仿真综合实验,评估其在临床医学专业本科教学中的应用效果。方法 以细菌抗原与抗体特异免疫反应为核心内容,把细菌分离培养、细菌O抗原和H抗原制备、玻片凝集与肥达试验融合为一个虚拟仿真综合实验。对照组采用传统实验教学模式,实验组采用传统实验操作与虚拟仿真综合实验相结合的教学模式,通过问卷调查和病原知识小测试比较两组教学效果。结果 两组各项指标比较存在差异,实验组高于对照组(P<0.05)。结论 虚拟仿真综合实验有利于学生系统掌握病原生物学、免疫学相关知识,加深对细菌生物学特性的理解,增强解决临床问题的能力。
- 张珍乔媛媛季晓飞张玉梅杜镇镇
- 关键词：病原生物学免疫学
- 分子伴侣幽门螺杆菌Hsp60与UreB的相互作用分析被引量：2
- 2016年
- 目的检测并分析幽门螺杆菌(Hp)尿素酶β亚基(UreB)与Hsp60之间的相互作用。方法克隆Hp 26695的尿素酶β亚基基因(UreB)融合GST标签和Hsp60基因融合His标签,分别在大肠埃希菌中进行异源表达。提取两种蛋白,采用pull-down方法检测两者间的相互作用。利用Modeller 9v2软件,以E.coli的GroEL为基础模建Hp Hsp60的三维结构,再与已知的UreB结构利用AutoDock 4.2软件进行分子共模拟,分析二者的相互作用面和关键氨基酸。结果构建了Hp Hsp60和尿素酶β亚基(UreB)的大肠埃希菌异源表达体系并获得纯化蛋白;Pull-down试验显示部分未融合GST标签的Hsp60出现在GST-UreB的洗脱液中,表明Hsp60与GST-UreB之间存在相互作用;以E.coli的GroEL为基础模建了Hp Hsp60的三维结构,利用docking技术构建UreB与Hp Hsp60的相互作用模型,发现其主要的相互作用面位于Hsp60的α9与UreB的α2之间,其可能形成氢键的关键位点为UreB的α2上的T147氨基酸与Hsp60的α9上的E237、K238。结论 Hp Hsp60能直接与尿素酶β亚基(UreB)相互作用,Hsp60可能通过这种相互作用在UreB成熟过程中发挥分子伴侣功能。这为阐明Hp尿素酶的组装与成熟机制奠定了基础。
- 赵慧琳季晓飞张艳丽柏雪莲李娇娇陈醒醒张玉梅李波清
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶HSP60分子伴侣相互作用
- 幽门螺杆菌hp0788基因对GES-1细胞功能影响的初步研究被引量：8
- 2017年
- 目的构建幽门螺杆菌ATCC26695hp0788基因敲除突变菌株(ATCC26695△0788km),观察hp0788基因对GES-1细胞功能的影响。方法以基因敲除质粒载体pSJHK构建基因敲除质粒,在hp0788基因的上下游分别扩增800~1100bp的基因片段作为同源臂,经限制性内切酶酶切后与质粒载体连接构建基因敲除质粒pSJHK-0788,通过电击转化构建hp0788基因敲除突变菌株,以FITC标记法检测其对GES-1细胞黏附能力的影响;以感染复数(MOI)为200:1构建幽门螺杆菌与GES-1细胞共培养体系,比较ATCC26695和ATCC26695△0788km对GES-1细胞凋亡及活性的影响。结果构建了hp0788基因双交换敲除质粒,电击转化获得hp0788基因敲除突变菌株。FITC标记ATCC26695和幽门螺杆菌ATCC26695△0788km与GES-1细胞混匀后采用流式细胞术检测FITC的荧光强度,ATCC26695组的黏附率记为100%,ATCC26695△0788km组黏附率为90.40%,差异均有统计学意义(t=2.80,P<0.05);ATCC26695与ATCC26695△0788km分别与GES-1细胞共培养8h和16h,流式细胞术检测细胞凋亡率分别为(15.73±7.84)%、(25.26±5.81)%和(12.46±12.30)%、(21.13±10.09)%,细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞活力分别为53%、40%和66%、50%,差异均有统计学意义(t值分别为3.30,2.80,-2.93,-2.76,P<0.05)。结论hp0788基因敲除幽门螺杆菌ATCC26695对GES-1细胞的黏附率下降,并使GES-1凋亡率下降,而细胞活力增高。表明hp0788基因是影响幽门螺杆菌ATCC26695感染GES-1细胞后引起细胞凋亡和活性变化的重要基因。
- 李娇娇荣倩玉季晓飞张莹赵慧琳周秀芝李波清
- 关键词：幽门螺杆菌基因敲除细胞凋亡细胞活力
- LAIR-1 siRNA对幽门螺杆菌诱导单核细胞THP-1凋亡的影响被引量：4
- 2016年
- 目的研究LAIR-1基因沉默对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)诱导单核细胞THP-1凋亡的影响。方法以Hp ATCC26695分别感染THP-1细胞6、12、24和48h,采用流式细胞术检测细胞凋亡及LAIR-1蛋白的表达。应用Lipofectamine RNAiMAX转染3对LAIR-1siRNAs入单核细胞THP-1中,采用半定量RT-PCR及流式细胞术检测沉默效应,筛选出的较有效的一对siRNA再转染入单核细胞THP-1,48h后加入Hp培养24h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Hp感染THP-1细胞6、12、24和48h后的细胞凋亡率分别为(84±1.77)%、(69.13±4.29)%、(48.3±3.37)%和(21.1±4.67)%,LAIR-1蛋白表达相对荧光强度分别为14 934±178、14 369±244、12 259±523和7438±539;转染后48h较有效的siRNA对LAIR-1mRNA及蛋白沉默效率分别为(39.1±4.67)%和(38.4±3.18)%;将筛选出的siRNA转染细胞48h后,用Hp感染24h,流式细胞仪检测显示转染组与阴性对照组细胞凋亡率分别为(56.1±9.8)%和(36.9±3.2)%,转染后感染组与空白组LAIR-1蛋白表达相对荧光强度分别为12 181±219和10 228±136。结论在Hp感染细胞THP-1 48h内,随着感染时间延长LAIR-1的表达及THP-1细胞凋亡率显著降低即LAIR-1siRNA能抑制LAIR-1的表达及THP-1细胞的凋亡。
- 孙辉张莹季晓飞陈醒醒李娇娇李波清
- 关键词：幽门螺杆菌单核细胞凋亡小分子干扰RNA
- ILK对幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞GES-1凋亡的影响
- 2018年
- 目的探讨ILK在幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞GES-1凋亡中的作用。方法体外培养GES-1细胞,随机分为空白对照组、Cpd22组和Hp组。采用罗丹明-鬼笔环肽检测不同浓度ILK抑制剂Cpd22对胃上皮细胞形态及细胞骨架改变的影响;Cpd22作用于GES-1细胞1h后,Western blot检测细胞内ILK表达情况;Hp与Cpd22作用1h的GES-1细胞共培养(MOI=100∶1)24h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP表达情况。结果与空白对照组相比,Cpd22浓度为2μmol/L时细胞形态变圆,间隙变大,细胞外缘伪足减少,细胞无法正常伸展。空白对照组与Cpd22组ILK相对表达量分别为0.83±0.01、0.74±0.01,比较差异有统计学意义(t=5.65,P<0.05)。空白对照组、Cpd22组、Hp组细胞凋亡率分别为(6.53±2.78)%、(21.13±5.60)%、(14.07±3.97)%,比较差异有统计学意义(t值分别为-5.52和-6.83,P<0.05);Caspase-3相对表达量分别为0.63±0.07、0.95±0.14、0.88±0.11,差异均有统计学意义(t值分别为-5.44和-5.88,P<0.05);PARP的相对表达量分别为1.17±0.07、0.93±0.16、1.09±0.12,差异有统计学意义(t值分别为3.32和3.46,P<0.05)。Cpd22与Hp共作用组细胞凋亡率为(30.37±5.17)%,Caspase-3的相对表达量为1.07±0.10,PARP的相对表达量为0.86±0.07,与Cpd22组比较差异均有统计学意义(t值分别为4.90、2.85和6.70,P<0.05)。结论抑制ILK表达可增强Hp诱导GES-1细胞凋亡的作用,其机制可能与细胞骨架重排和Caspase-3的表达有关。
- 徐正丁雲飞荣倩玉吴玉龙赵慧琳季晓飞张莹李波清
- 关键词：幽门螺杆菌GES-1细胞ILK
- 一种幽门螺杆菌基因敲除载体质粒的构建方法
- 本发明涉及生物基因工程领域中的基因敲除技术，特别涉及一种幽门螺杆菌基因敲除载体质粒的构建方法。选择<i>Helicobacter？pylori？</i>26695作为幽门螺杆菌基因敲除的研究菌株，...
- 李波清季晓飞赵慧琳张莹
- 文献传递
- 面向成人教育的免疫学虚拟仿真综合实验的设计与实践被引量：1
- 2019年
- 目的设计制作免疫学虚拟仿真综合实验,并探讨其在成人医学教育中的教学效果。方法以免疫应答为主线,把免疫学中的几个互相关联的经典实验有机整合成一个虚拟仿真综合性实验项目,包含从抗体的制备到临床诊断应用的全过程,通过网络平台对成教学生开放,利用问卷调查教学效果。结果问卷显示,93%的学生满意或较满意此种教学方式,并在深化理解学科知识、提高自主学习能力等方面对学生有明显帮助。结论虚拟仿真综合实验不受时空限制,缓解了成教学生工作与学习的矛盾,并有利于教学质量的提高。
- 杜镇镇张珍胡涛季晓飞耿丽
- 关键词：成人高等教育免疫学实验教学
- 一种幽门螺杆菌基因无痕敲除的方法
- 本发明涉及微生物基因工程领域中的基因敲除技术，特别涉及一种幽门螺杆菌基因无痕敲除的方法，（a）构建适用于幽门螺杆菌的敲除模板质粒和辅助质粒；（b）设计目的基因同源重组双交换同源臂，在敲除模板质粒基础上构建目的基因敲除质粒...
- 季晓飞赵慧琳李波清张莹王颖
- 文献传递
- 幽门螺杆菌TaqMan MGB探针双重荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2018年
- 目的建立用于幽门螺杆菌快速定量检测和分型的TaqMan MGB探针双重荧光定量PCR方法。方法采用Primer Premier 5软件分析设计引物和探针,采用双重荧光定量PCR扩增幽门螺杆菌CagA和VacA基因片段,建立循环数与拷贝数关系的标准曲线。检测临床标本中所含幽门螺杆菌的循环数,用该方法对临床胃黏膜标本进行检测并与标准曲线对比,计算所含幽门螺杆菌的拷贝数。结果建立的TaqMan MGB双重荧光定量PCR方法检测幽门螺杆菌质粒的线性范围是10~2~10~8拷贝/μl,CagA和VacA基因标准曲线的相关系数分别是0.977 8和0.990 4。29份临床胃黏膜标本的CagA和VacA基因循环数Ct值分别在29~35和30~35之间,幽门螺杆菌拷贝数分别在1.0×10^(1.39)~1.0×10^(3.87)和1.0×10^(3.06)~1.0×10^(3.91)之间,且临床标本中的幽门螺杆菌均为I型。结论建立的TaqMan MGB双重荧光定量PCR法具有敏感、精确、快速的特点,可用于幽门螺杆菌的快速定量检测与分型鉴定。
- 荣倩玉陈醒醒刘艺凝徐正丁雲飞吴玉龙季晓飞张莹李波清
- 关键词：幽门螺杆菌CAGAVACA
- 整合素连接激酶对幽门螺杆菌所致细胞凋亡的影响
- 2018年
- 目的探讨整合素连接激酶对幽门螺杆菌(Hp)致胃癌细胞MGC-803凋亡的影响。方法实验分为空白对照组(胃癌细胞MGC-803正常条件培养),激动剂作用组(MGC803细胞与0.4μmol/L的整合素连接激酶激动剂LPTP共培养),Hp作用组(MGC803细胞与Hp(MOI值为100∶1)共培养)和激动剂加Hp作用组(MGC803细胞与0.4μmol/L的LPTP共培养1h,与Hp(MOI值为100∶1)共培养)。24h后流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白PARP、Casepase-3的表达。结果激动剂作用组、Hp作用组、激动剂加Hp作用组细胞凋亡率分别为(23.45±1.484 92)%、(30.7±3.111 27)%、(16.15±1.202 08)%,与空白对照组(10.1±0.707 11)%比较,差异均有统计学意义(t值分别为-11.478,-9.131,-6.135,P<0.05);激动剂加Hp作用组与Hp作用组比较差异有统计学意义(t=6.169,P<0.05)。激动剂作用组、Hp作用组、激动剂加Hp作用组PARP蛋白相对表达量分别为0.89±0.57、1.245±0.21、0.87±0.057,与空白对照组0.6±0.06比较差异均有统计学意义(t值分别为-4.734,-13.492,-4.401,P<0.05);Casepase-3蛋白表达分别为0.78±0.35、1.32±0.04、0.87±0.45;与空白对照组0.47±0.07比较差异有统计学意义(t值分别为-5.635,-14.577,-8.037,P<0.05)。结论整合素连接激酶在Hp感染MGC-803细胞中起抗凋亡的作用。
- 丁雲飞刘艺凝徐正荣倩玉吴玉龙季晓飞赵慧琳张莹李波清
- 关键词：幽门螺杆菌整合素连接激酶细胞凋亡MGC-803细胞
