蒋永兴
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 发文基金：吉林省卫生厅课题吉林省科技厅国际合作项目更多>>
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- ODDD调控EGFP基因的乏氧特异表达载体的构建及其意义
- 2012年
- 目的:构建乏氧诱导因子的氧依赖降解结构域(ODDD)调控的乏氧特异性表达荧光报告载体,探索其乏氧调控目的基因表达的可行性。方法:基因重组技术构建含有序列ODDD403-601aa、ODDD549-575aa和其2串联体调控增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光报告载体。φA细胞中瞬时表达EGFP,应用RT-PCR技术、Westernblotting技术和流式细胞术检测ODDD调控EGFP乏氧特异性表达。结果:克隆得到了ODDD/EGFP表达载体,进行细胞转染实验,在细胞中成功表达EGFP。Western blotting检测,ODDD可以调控EGFP乏氧特异性表达。流式细胞术检测,正常氧浓度下细胞转染pEGFP-ODDD401-603、pEGFP-ODDD549-575和pEGFP-ODDD2(549-575)EGFP的荧光强度分别为(6.06±1.97)%、(11.99±1.13)%和(23.16±2.79)%,低于缺氧条件下EGFP的表达量(P<0.05)。结论:ODDD对靶基因对氧的反应性调节受细胞内的蛋白酶影响;ODDD的调控作用发生在翻译后的蛋白水平,且与细胞内蛋白酶系统功能密切相关。
- 方艳秋刘磊谭岩蒋永兴
- 关键词：缺氧增强型绿色荧光蛋白基因治疗
- 抑制c-FLIP_L表达增强rhTRAIL蛋白杀伤肺癌A549细胞的研究被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨抑制c-FLIPL表达增强rhTRAIL蛋白杀伤肺癌A549细胞株的可行性。方法:构建c-FLIPL序列特异性siRNAs表达载体并转染A549细胞抑制c-FLIPL基因表达,化学抑制剂他莫昔芬抑制c-FLIPL蛋白表达。RT-PCR和Western blot法检测c-FLIPL的mRNA和蛋白表达的变化。Western blot法检测caspase-8的活化情况。流式细胞仪检测A549细胞凋亡率,MTT法检测联合应用RNAi+rhTRAIL和他莫昔芬+rhTRAIL对A549细胞的杀伤活性。结果:特异性siRNA片段能显著降低A549细胞中c-FLIPL的mRNA水平和蛋白水平。他莫昔芬可以显著抑制c-FLIPL蛋白的表达。两者均可以实现caspase-8的活化,并促进rhTRAIL对A549细胞诱导凋亡作用,凋亡率从2.52%提高到64.5%和59.2%(P<0.05),他莫昔芬和siRNA均可显著促进rhTRAIL蛋白对A549细胞的增殖抑制作用,抑制率分别提高到73.2%和69.5%(P<0.05)。结论:靶向抑制FLIP蛋白表达能增加A549细胞对rhTRAIL诱导细胞凋亡的敏感性,有利于促进rhTRAIL蛋白在治疗NSCLC方面的研究应用。
- 谭岩刘磊方艳秋蒋永兴
- 关键词：A549细胞株
- ODDD乏氧靶向HSV1-TK/GCV系统对体外肝癌细胞的杀伤作用被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨pEGFP-TK-ODDD基因表达载体乏氧特异性杀伤肝癌细胞的可行性。方法:通过LipofectamineTM2000将重组基因质粒pEGFP-TK-ODDD在肝癌细胞株SMMC7721和HepG2中进行瞬时转染。流式细胞仪分析EGFP的表达强度分析质粒转染效率。MTT法检测GCV作用24小时后转染细胞在不同氧浓度下的生存率。结果:SMMC7721细胞和HepG2细胞质粒转染效率分别为33.23%和36.97%;MTT结果显示,GCV浓度为12.5 mg/L时,缺氧环境下转染pEGFP-TK-ODDD基因表达载体的SMMC7721细胞和HepG2细胞存活率,细胞的生存率分别为81.25%和76.55%,明显低于对正常氧环境中细胞生存率的92.12%和94.36%(P<0.05)。结论:ODDD可以特异的调控HSV1-TK/GCV系统对乏氧肝癌细胞的靶向杀伤作用。
- 方艳秋刘磊谭岩蒋永兴
- 关键词：缺氧肝癌自杀基因
