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杨晓宇: 作品数：11 被引量：24H指数：3; 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>; 发文基金：四川省科技支撑计划国家现代农业产业技术体系建设项目国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

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猪繁殖与呼吸综合征类NADC30与HP-PRRSV毒株RT-PCR鉴别方法的建立与应用被引量：5: 2019年; 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种能够引起大面积呼吸道疾病并快速传播,导致母猪流产和仔猪死亡的RNA病毒,其特性为变异快,存在毒株间的重组。因此,病原的快速检测和鉴定对于该病的防控十分重要。本试验建立了一种能够区分类高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30与HP-PRRSV毒株的检测方法,根据nsp2基因的高变区的比对结果,选择其保守序列,设计一对检测引物,类NADC30扩增片段大小为334 bp,HP-PRRSV毒株扩增片段大小为514 bp,通过优化反应条件,最终建立了一种一对引物就可以区分检测类NADC30与HP-PRRSV毒株的RT-PCR检测方法。应用本试验所建立的RT-PCR方法对2017年12月至2018年2月采至四川多地区的疑似PRRSV感染发病的46份肺脏进行检测。结果显示,类NADC30检出率为32. 6%,高于HP-PRRSV毒株的检出率(10. 9%)。该方法的建立,为类NADC30和HP-PRRSV毒株的快速鉴别诊断提供了方法,具有重要意义。; 徐雷赵军杨晓宇殷鑫欢张继宗朱玲; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征 RT-PCR

不同浓度下的中药复方对四川白兔生长的影响被引量：1: 2019年; 本次研究旨在探讨中药复方对四川白兔生长性能、免疫功能及其抗氧化情况的作用。采用单因子实验设计,选择30日龄断奶四川白兔仔兔100只,随机分为5组(每组20只,雌雄各半),试验3组为高浓度组(基础日粮+3%中药添加剂),试验2组为中等浓度组(基础日粮+2%中药添加剂),试验1组为低浓度组(基础日粮+1%中药添加剂),试验4组为阳性组(基础日粮+1%杆菌肽锌+1%硫酸黏杆菌素),对照组饲喂基础日粮。试验期为56 d,其中预试期为7 d,正试期为49 d。正试期内测定试兔的生长性能,试验结束时测定试兔的抗氧化和免疫指标。结果显示:高浓度组显著提高了兔的Ig M (p<0.05),中等浓度组极显著提高了兔的Ig A (p<0.01),且死亡率均为0;低浓度组和高浓度组显著提高了兔丙二醛(MDA)或超氧化物歧化酶(SOD)的活性;低浓度组显著提高了兔的脾指数(p<0.05);高浓度组显著提高或降低了兔十二指肠的绒毛高度或隐窝深度(p<0.05);中等浓度组显著提高了回肠的绒毛高度(p<0.0.5)。饲粮添加一定的中药复方不仅能改善兔子的生长性能,增强四川白兔的免疫能力及抗氧化性,也可以降低四川白兔死亡发生概率。; 杨锐叶刚杨晓宇董琦李金良李思聪张敏王吴燕; 关键词：腹泻率死亡率抗氧化功能免疫功能

猪非典型性瘟病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2: 2019年; 为建立一种快速、准确检测猪非典型性瘟病毒(APPV)的方法,根据GenBank发布的APPV NS2基因序列,设计合成1对扩增后目的基因片段大小为500 bp的特异性引物。建立的RT-PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测结果均为阴性,该方法对APPV的最低检出量为1μl 4.95×10~4拷贝,重复性试验中组间、组内试验结果均与预期相符。应用该方法对68份疑似患病的仔猪样品进行检测,阳性病料检出率为7.35%。利用Mega7.0绘制APPV系统进化树,对APPV进行遗传进化分析,结果显示本试验检出的APPV(SC株)与中国报道的APPV的亲缘关系较近。建立的APPV RT-PCR检测方法可用于APPV的临床诊断及流行病学检测。; 郭佳琪杨晓宇冯宇杨钒徐志文朱玲; 关键词：RT-PCR

猪非典型性瘟病毒与猪流行性腹泻病毒双重PCR方法的建立与应用被引量：2: 2018年; 为了快速准确地检测出猪非典型性瘟病毒(APPV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV),根据Gen Bank中发布的PEDV S2基因和APPV NS3基因的序列,分别选取PEDV S2基因和APPV NS3基因的保守序列,设计、合成了1对特异性引物。通过对体系进行优化,分别扩增出190 bp和500 bp的特异性片段。建立的双重RT-PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪轮状病毒(RV)的检测均为阴性。对PEDV和APPV的最低检出量分别为1μl 2.65×10~5和1μl 3.56×10~4,对四川遂宁、眉山等地采集到的腹泻、肌肉震颤的病料进行检测,PEDV、APPV阳性病料检出率分别为41. 18%和11. 76%,经分别与特异性检测APPV和PEDV的单一RT-PCR法检测结果进行比较分析,符合率均为100%。与单一RT-PCR检测方法具有相同特异性和重复性,可用于临床检测。; 杨晓宇徐雷殷鑫欢张继宗徐志文朱玲; 关键词：猪流行性腹泻病毒双重RT-PCR

金黄色葡萄球菌和猪链球菌混合感染引发的脑膜炎被引量：2: 2018年; 金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界，同时也存在于人和动物的体表、鼻腔、消化道等部位，是一类条件性致病菌。金黄色葡萄球菌可引起人和动物各种急、慢性感染，包括尿道炎、脊髓炎、心肌炎、肺炎、脑膜炎、肠炎、乳腺炎、败血症等。该菌在侵入机体后分泌多种毒力因子，如溶血素、杀白细胞毒素.; 殷鑫欢杨晓宇徐雷鲁令华曾喻兵徐志文朱玲; 关键词：金黄色葡萄球菌脑膜炎猪链球菌慢性感染毒力因子

藏猪IFN-λ3成熟肽基因克隆及原核表达、抗病毒效价测定: 2018年; 为探究藏猪Ⅲ型干扰素抗病毒作用,以藏猪肠道和肺脏核酸为模板,采用RT-PCR扩增克隆IFN-λ3基因(ZPoIFN-λ3),经测序鉴定后构建原核表达载体pET-32a(+)-mZPoIFN-λ3,并于大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过优化诱导时间、IPTG浓度,利用镍柱亲和层析纯化表达蛋白,并采用SDS-PAGE验证。纯化蛋白经透析复性浓缩,以此为免疫原制备鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体,采用Western Blot鉴定。通过细胞病变抑制法测定表达蛋白在MDBK/VSV系统的抗病毒活性。结果表明,成功克隆藏猪IFN-λ3成熟肽基因,经分析发现藏猪IFN-λ3核酸序列与野猪核酸同源性为100%。成功构建藏猪IFN-λ3原核重组表达质粒,并成功表达大小为34 ku蛋白,蛋白纯化后SDS-PAGE显示为单一条带,Western Blot鉴定结果显示鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体具有良好免疫原性。p ET-32a(+)-mPoIFN-λ3表达蛋白在MDBK/VSV系统抗病毒效价为10×24.5U·0.1 mL-1,比活力为2×103U·mg-1。研究首次克隆藏猪IFN-λ3基因并原核表达,通过研究其抗病毒作用,为进一步研究藏猪IFN-λ3生物学特性和相关基因重组药物生物学功能奠定基础,为临床新药物研发提供新方向。; 李原野殷玥陈瑛琪张继宗杨晓宇王佳煜朱玲徐志文; 关键词：藏猪原核表达抗病毒

猪δ冠状病毒重组M蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用被引量：6: 2020年; 本研究旨在建立一种可靠的检测猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)IgG抗体的间接ELISA方法,了解四川地区PDCoV的流行情况。采用原核表达系统表达PDCoV膜蛋白(M)作为检测抗原,通过反应条件的优化,建立了基于PDCoV M蛋白的间接ELISA方法,命名为PDCoV-rM-ELISA,并用该方法对430份临床样品进行检测。成功构建了重组表达菌BL21-pET-32a-M,经诱导表达后获得了重组M蛋白,Western bolt检测表明,重组蛋白具有良好的反应原性。以其作为包被抗原建立的PDCoV-rM-ELISA方法仅对PDCoV血清检测为阳性,与猪流行性腹泻病毒等5种猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;该方法灵敏性高、重复性好,批间和批内重复性变异系数均小于10%;与成品化PDCoV抗体检测试剂盒同时检测48份临床血清,两种方法的阳性符合率为88.46%,阴性符合率为90.91%,总符合率为89.58%。临床样品检测结果表明,各地样本PDCoV抗体阳性率平均为11.86%,且统计学分析显示,母猪比仔猪和育肥猪高2.25倍的PDCoV感染概率。笔者成功表达了PDCoV M蛋白,建立了PDCoV-rM-ELISA检测方法,该方法具有较高的敏感性、良好的特异性和重复性,可用于临床猪血清样品种PDCoV IgG抗体的检测。; 冯宇殷鑫欢杨晓宇徐雷徐志文朱玲; 关键词：原核表达间接ELISA

非典型性瘟病毒SYBR Green Ⅱ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1: 2018年; 为建立一种快速检测猪非典型性瘟病毒(APPV)的方法,本实验建立了APPV SYBR Green Ⅱ荧光定量RT-PCR检测方法。该方法特异性试验结果显示,除APPV外,猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒等常见猪病病原检测均为阴性,表明其特异性良好;该方法最低检测限为2.8×10~3拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验的组内、组间变异系数均小于1%。利用该方法对临床56份来自四川各地的临床病料样品进行检测,检出5份阳性样品,且与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。本研究建立的APPV荧光定量RT-PCR检测方法为APPV临床检出以及后期并发症的研究奠定了基础。; 杨晓宇徐雷殷鑫欢张继宗鲁令华冯宇朱玲; 关键词：荧光定量RT-PCR SYBR

多重TaqMan荧光定量PCR检测仔猪先天性震颤相关病毒方法的建立与应用被引量：1: 2020年; 旨在研究能够快速、准确、灵敏地鉴别、诊断引起仔猪先天性震颤的猪非典型瘟病毒(Atypical porcine pestivirus,APPV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒3型(Porcine circoviruses type 3,PCV-3)及猪捷申病毒1型(Porcine teschovirus 1,PTV-1)的方法。通过对GenBank中登录的APPV的NS3基因序列、CSFV的E2基因序列、PCV-3的ORF2基因序列和PTV-1的VP1基因序列进行分析,设计针对4种病毒的特异性引物和TaqMan水解探针。通过对反应条件和反应程序进行优化,拟建立针对仔猪先天性震颤相关病毒的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,研究得到的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法能够特异性检测APPV、CSFV、PCV-3和PTV-1,而与其他病原无交叉反应;该研究方法对APPV、CSFV、PCV-3和PTV-1的最低检测量分别为1μl 9.2×10^2拷贝、48拷贝、56拷贝和17拷贝。重复性试验结果显示,组内、组间变异系数均小于2.10%,重复性和稳定性较为突出。用该方法对273份临床样品进行检测,结果显示,APPV、CSFV、PTV-1和PCV-3的阳性率分别为20.5%、2.9%、1.5%和10.6%,其中APPV、CSFV二者共同感染的检出率为1.5%,APPV、PCV-3二者共同感染的检出率为4.4%,APPV、PTV-1二者共同感染的检出率为1.5%,APPV、CSFV、PCV-3共同感染的检出率为1.1%。该检测方法操作简单、耗时短、不易对环境造成污染,检测结果灵敏、准确,基于该方法对四川地区仔猪先天性震颤相关病毒共感染情况进行的流行病学调查,可以为后期研究提供重要的数据基础。; 杨晓宇陈世界林华张婧安微朱玲

一例耐药严重的大肠杆菌和轮状病毒混合感染案例: 2018年; 2017年12月1日,四川省绵阳市某猪场仔猪出现黄色水样腹泻,猪只外部耳朵发绀,皮毛凌乱,消瘦,解剖之后发现猪只的脾脏呈现两端大小不一,且边缘存在一些锯齿状,肠道积满黄色的水样物,采取猪只的小肠、肝脏组织进行分离细菌,结果表明该猪场感染了大肠杆菌,同时对腹泻物进行PCR和RT-PCR的检测,该猪场同时存在轮状病毒感染。将分离的菌株进行实验室药敏试验,结果表明该大肠杆菌耐药特别严重,氨基糖苷类、恩诺沙星、氟苯尼考、多西环素以及很多头孢三四代对它的效果都不好。; 殷鑫欢杨晓宇徐雷王佳煜李原野徐志文朱玲; 关键词：猪轮状病毒猪大肠杆菌药敏试验

杨晓宇

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