景爱霞
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：北京生物工程研究所更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 甲基营养菌MP688甲醛脱氢酶的表达、纯化及酶活性质被引量：1
- 2017年
- 目的克隆甲基营养菌MP688甲醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase)基因adhA,在大肠杆菌中表达、纯化,并研究其酶学性质。方法 PCR扩增甲醛脱氢酶基因adhA,构建表达载体p TIG-AdhA,在BL21(DE3)中诱导表达,经Ni+亲和层析纯化,利用AHMT法进行体外酶学性质分析。结果成功构建甲醛脱氢酶表达载体,在大肠杆菌中AdhA表达量达总蛋白的50%以上,其中大部分表达产物可溶,纯化得到纯度为95%的甲醛脱氢酶。甲醛脱氢酶能以甲醛为底物,最适pH为7.0,最适反应温度为30℃,室温保存6 d后酶活约保留60%。结论在大肠杆菌中实现了甲基营养菌甲醛脱氢酶的可溶表达,在所考察的底物中,甲醛为该酶的最适底物。
- 景爱霞毕波李彤熊向华汪建华张惟材
- 关键词：醛脱氢酶克隆纯化酶学性质
- 抗A型肉毒毒素鼠源性单克隆抗体的制备和鉴定被引量：4
- 2016年
- 目的制备与鉴定抗A型肉毒神经毒素重链C端(heavy chain of botulinum neurotoxin serotype A,Bo NT/AHc)特异性鼠单克隆抗体。方法通过纯化Bo NT/AHc抗原、免疫BALB/c小鼠并建立杂交瘤细胞以制备鼠单抗,用ELISA、Western印迹实验和抗体分型试剂盒进行分析鉴定,并通过ELISA检测鼠单抗与Bo NT/AHc突变体结合,初步鉴定其在Bo NT/AHc的结合表位。结果得到纯度较高的Bo NT/AHc抗原,制备了4株特异性鼠单抗1A4、3H3、3H7、5H8。间接ELISA结果显示,单抗细胞上清效价均>3.0×103;Western印迹检测结果显示,单抗均能与Bo NT/AHc特异性结合;抗体亚型鉴定结果为1A4、3H7属于Ig G1(Κ),3H3属于Ig M(Κ),而5H8属于Ig G2b(Κ);叠加ELISA实验表明,4株单抗抗原识别表位相近;用ELISA检测单抗与Bo NT/AHc突变体结合实验结果初步确定了4株单抗与Bo NT/AHc的结合表位。结论对抗A型肉毒毒素鼠源性抗体完成了制备和鉴定,为肉毒毒素中和抗体的开发与阐明中和抗体的表位奠定了基础。
- 赵巧林陆璐毕波景爱霞汪建华张惟材熊向华
- 关键词：肉毒杆菌毒素重链抗体单克隆中和抗体表位
