张云静
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军第二炮兵总医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金北京市科技新星计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 利用GST融合蛋白表达系统表达与纯化人N-Ras蛋白被引量：1
- 2015年
- 目的:克隆人N-ras蛋白全长编码区基因,获得其原核表达产物,并对融合蛋白进行纯化。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人N-ras蛋白全长编码区基因,将其克隆到p GEX-KG载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化,SDS-PAGE鉴定表达与纯化产物。结果:从人乳腺文库中扩增获得约600 bp的DNA片段,并克隆至p GEX-KG载体上,经测序与目的序列完全一致;在大肠杆菌Rossate中诱导表达出相对分子质量约47×103的目的蛋白;纯化后,经鉴定获得了纯度较高的重组蛋白GST-N-Ras。结论:获得了重组蛋白GST-N-ras,为后续深入研究Ras基因与其他癌基因、抑癌基因的相互作用奠定了基础。
- 张云静冯滢滢徐小洁梁迎春张立王涛李玲郭靖纪贝贝张蓉叶棋浓
- 关键词：小G蛋白原核表达纯化
- H-Ras结构域的原核表达及纯化
- 2015年
- 目的:克隆人H-Ras部分片段基因,获得其原核表达产物,并对融合蛋白进行纯化。方法:采用PCR技术从质粒Myc-H-Ras中扩增H-Ras(1-165)和H-Ras(165-189)结构域片段,将其克隆到p GEX-KG载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达与纯化产物。结果:从Myc-H-Ras质粒中分别扩增获得约500和100 bp的DNA片段,并克隆至p GEX-KG载体,经测序与目的序列完全一致;在大肠杆菌Rossate中诱导表达出相对分子质量分别为46×103和29×103的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-H-Ras(1-165)和GST-H-Ras(165-189)。结论:获得了重组蛋白GST-H-Ras(1-165)、GST-H-Ras(165-189),为后续深入研究H-Ras影响肿瘤细胞生长的机制奠定了实验基础。
- 冯滢滢张云静徐小洁李玲郭靖洪甜张蓉赵克叶棋浓
- 关键词：片段原核表达纯化
- 人H-ras基因真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞生长的促进作用
- 2015年
- 目的:构建癌基因H-ras真核表达载体,并检测其对肿瘤细胞生长的作用。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增H-ras基因片段,将其插入p XJ-40-myc载体后转染人胚肾HEK293T细胞,用Western印迹检测该融合蛋白的表达;将重组质粒转染人肠癌HCT-116细胞和人肝癌Hep G2细胞,通过细胞生长曲线(CCK8法)对myc-H-ras影响肿瘤细胞生长的情况进行分析。结果:利用PCR技术,从乳腺文库中扩增出H-ras基因片段,并成功插入p XJ-40-myc载体;重组质粒转染HEK293T细胞,经Western印迹检测融合蛋白正确表达;细胞生长曲线结果显示,转染myc-H-ras的结肠癌HCT-116细胞和人肝癌Hep G2细胞比转染空载体的细胞生长快。结论:构建了人H-ras基因真核表达载体,为进一步研究ras基因在肿瘤细胞中的作用奠定了一定基础。
- 张云静冯滢滢徐小洁王涛张柯梁迎春张蓉叶棋浓
- 关键词：H-RAS基因真核表达载体肿瘤细胞
- myc-p62融合蛋白的表达及其对ERK磷酸化的抑制
- 2015年
- 目的构建带myc标签的自噬标志蛋白P62基因真核表达载体,获得myc-p62融合表达蛋白,并对其功能进行初步检测。方法利用聚合酶链式反应从乳腺文库中体外扩增人P62基因编码序列,将其与空p XJ-40-myc载体正确连接,重组质粒myc-p62转染HEK293T细胞,用Western blot法检测该融合蛋白的表达情况,并检测该蛋白对细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。结果构建得到myc-P62基因的真核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源性基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;经Western blot法检测,融合蛋白成功表达,并能够抑制ERK磷酸化。结论成功表达了myc-p62融合蛋白并能抑制ERK磷酸化。
- 张云静冯滢滢张立徐小洁王涛范忠义叶棋浓张蓉
- 关键词：真核表达载体自噬ERK磷酸化
