周爱武
- 作品数：6 被引量：1H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Z突变α_1-抗胰蛋白酶缺乏症的研究进展被引量：1
- 2017年
- α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族(Serpin),是人血浆中最重要的蛋白酶抑制剂,能抑制多种蛋白酶,从而抑制组织的降解。经典的α_1-AT缺乏症由Z突变(Glu342Lys)引起,该突变导致蛋白在肝细胞内形成多聚体并聚积,引起肝细胞损伤,同时由于血浆中该蛋白浓度的减少,破坏了蛋白酶与蛋白酶抑制剂之间的平衡,故可引起肺气肿和新生儿肝炎等疾病。该文主要从α_1-AT的分子结构、基因多态性,及其相关疾病的治疗等方面概述Z突变所致的α_1-AT缺乏症的致病机制和相关预后的研究进展。
- 周卓超陈颖朱书仪沈雯琦周爱武
- 关键词：Α1-抗胰蛋白酶Α1-抗胰蛋白酶缺乏症新生儿肝炎
- 嗜酸乳杆菌ATCC4356 S-层蛋白的克隆、表达和纯化
- 2014年
- 目的克隆嗜酸乳杆菌S层蛋白的编码基因,使其原核表达并纯化表达产物。方法对嗜酸乳杆菌S层蛋白(S-layer protein)基因进行提取和扩增,连接pET-SUMO3表达载体并转入大肠杆菌内使其表达;采用镍柱亲和层析技术对S层蛋白进行提取及纯化,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting验证表达产物。结果嗜酸乳杆菌ATCC4356的S层蛋白编码基因(1 263 bp)被克隆,且与相关基因有98%同源性。SDS-PAGE及Western blotting证明,重组融合蛋白在细菌中能够高效表达且部分融合蛋白可经亲和层析及酶切去除融合标签获得重组S-层蛋白(43 0000 Da)。结论通过获得嗜酸乳杆菌S-层蛋白编码基因的方法可实现其原核表达,并得到纯度较高的S层蛋白,为后续的生物学功能研究奠定了基础。
- 孙琴曾乃燕周爱武叶玮
- 关键词：S-层蛋白克隆纯化
- 重组大鼠α2巨球蛋白的表达、纯化及结晶
- 2016年
- 目的·获取高纯度的大鼠α2巨球蛋白(Rα2M),并对蛋白结晶进行筛选,以期获取高分辨率衍射数据,为后续结构生物学研究奠定基础。方法·将Rα2M基因克隆到真核表达载体p CEP4中,使用PEI介导的瞬时转染方法在HEK293EBNA细胞中表达重组蛋白Rα2M。采用阴离子柱交换层析和镍柱亲和层析技术从表达培养基中提纯Rα2M,对纯化蛋白进行结晶筛选和优化。结果·经纯化后,得到相对分子质量约为180 000的重组蛋白Rα2M的全长蛋白,以及被切割后的大片段和小片段。通过结晶筛选和优化后,得到了Rα2M的蛋白晶体。结论·获得了可用于晶体衍射的Rα2M蛋白晶体,为后续的结构解析奠定了基础。
- 冯玲玲周爱武
- 关键词：Α2巨球蛋白真核表达纯化
- 重组人亲环蛋白CypB的制备及活性鉴定
- 2016年
- 目的·构建人源亲环蛋白B(hCypB)的表达载体,通过原核表达体系制备有活性的hCypB。方法·通过双酶切法将编码hCypB基因构建到p GEX-6p-1表达载体中,采用亲和层析法一步纯化hCypB,最后通过GST-pulldown验证过表达的hCypB的活性。结果·经DNA测序验证,成功构建了hCypB的表达质粒。通过GST柱纯化可以从1 L过夜诱导的大肠埃希菌菌液中获得26 mg,纯度达到90%的GST-hCypB融合蛋白,且GST-pulldown试验证明该重组蛋白可以与脯氨酸-3-羟化酶1(P3H1)及软骨相关蛋白(CRTAP)形成三元复合物。结论·利用该实验方法可以在短期内获得大量高纯度、有活性的人源亲环蛋白CypB。
- 章琪吴佳伟周爱武
- 关键词：复合物
- 一种胰蛋白酶制备方法
- 本发明公开了一种胰蛋白酶制备方法，即利用Psumo3‑AMP载体将Sumo3标签蛋白第92位甘氨酸后连接胰蛋白酶的第24位异亮氨酸，过表达胰蛋白酶融合蛋白形成包涵体，然后将包涵体清洗、溶解和复性，最后将胰蛋白酶激活和纯化...
- 周爱武张飞
- 文献传递
- 重组人源抑制型受体TIGIT在大肠埃希菌中的制备及其作用特性研究
- 2017年
- 目的·在大肠埃希菌中制备人源GST-TIGIT融合蛋白并探究其与具核梭杆菌(Fn)互相作用特性。方法·对人源免疫调节蛋白TIGIT的基因进行扩增,重组到p GEX4T2表达载体中并转入大肠埃希菌BL21(DE3)中表达融合蛋白;利用GST亲和层析方法纯化GST-TIGIT融合蛋白;采用特异性黏附试验检测GST-TIGIT融合蛋白与Fn的相互作用。结果·GST-TIGIT融合蛋白在大肠埃希菌中成功表达并利用GST亲和层析柱得到纯化蛋白;GST-TIGIT融合蛋白可特异性地结合于Fn表面,但与嗜酸乳杆菌结合较弱。结论·通过原核表达系统得到有活性的人源GST-TIGIT融合蛋白,并初步证明了其与Fn的黏附作用,为后续研究TIGIT蛋白与Fn特异性相互作用的机制奠定了基础。
- 陈孝云周爱武叶玮
- 关键词：克隆纯化具核梭杆菌黏附性
