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黄俊华: 作品数：10 被引量：13H指数：2; 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

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猪瘟病毒N~(pro)蛋白核仁穿梭及其对病毒复制的影响: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fevervirus,CSFV)引起的一种烈性传染病。猪瘟病毒Npro蛋白具有自我切割酶活性和抑制I型干扰素产生的功...; 李永锋申梁黄俊华李超李素孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒病毒复制; 文献传递

稳定表达T7RNA聚合酶PK-15细胞系的建立被引量：1: 2011年; 为构建稳定表达T7RNA聚合酶(RNAP)的猪肾细胞系(PK-15),本研究采用PCR方法,以E.coliBL21(DE3)细菌基因组为模板扩增T7RNAP基因,将其克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒pLXSN-T7。采用脂质体将pLXSN-T7转染至PT67细胞中,经G418筛选培养获得重组逆转录病毒rMLV-T7,将其接种于PK-15细胞进行G418加压筛选和纯化;应用PCR、间接免疫荧光试验及T7启动子控制下的红色荧光蛋白的重组表达质粒(pET-RED)进行瞬时表达,检测T7RNAP的表达及活性,结果表明筛选所得的细胞系PK/T7的不同代次均具有转录活性。本研究建立稳定表达T7RNAP的细胞系PK/T7,为实现细胞内T7启动的转录和猪源RNA病毒等的反向遗传操作提供了有效的方法。; 黄俊华贺番孙元张鑫常天明李宏宇仇华吉; 关键词：逆转录病毒载体稳定细胞系

猪瘟兔化弱毒疫苗株适应家兔的分子基础: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种猪烈性传染病。我国在国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)中...; 李超李永锋申梁黄俊华孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒疫苗株病毒复制; 文献传递

猪瘟病毒NS3蛋白的重组表达及其单克隆抗体的制备被引量：6: 2010年; 以含有猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA的重组质粒pOKShimen为模板,经PCR扩增获得NS3基因,利用原核表达载体pMAL-c2X、pET32a以及杆状病毒表达载体pFastBacH T B表达CSFV石门株NS3基因,获得3种重组蛋白:MBP-NS3、His-NS3和rNS3。Western-blot分析及间接免疫荧光试验证实,这3种不同载体表达的NS3蛋白均能被猪瘟阳性血清所识别。利用直链淀粉树脂柱对重组蛋白MBP-NS3进行纯化后,用其免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,用间接ELISA筛选,获得2株能稳定传代并分泌针对抗CSFVNS3蛋白单克隆抗体的细胞株,命名为1D10和1H10。Western-blot分析及间接免疫荧光试验结果证明,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均可识别CSFVNS3蛋白。; 常天明孙元李宏宇贺番李淼黄俊华仇华吉; 关键词：猪瘟病毒单克隆抗体

猪瘟病毒Npro蛋白核仁穿梭及其对病毒复制的影响: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fevervirus,CSFV)引起的一种烈性传染病。猪瘟病毒Npro蛋白具有自我切割酶活性和抑制I型干扰素产生的功...; 李永锋申梁黄俊华李超李素孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒病毒复制

猪瘟病毒Npro蛋白核仁穿梭及其对病毒复制的影响: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种烈性传染病。猪瘟病毒Npro蛋白具有自我切割酶活性和抑制Ⅰ型干扰素产生的...; 李永锋申梁黄俊华李超李素孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒病毒复制

共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因和猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒的构建及其在小鼠模型上的免疫原性分析被引量：6: 2010年; 本研究旨在以复制缺陷型人5型腺病毒为载体,构建一株同时表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株GP5蛋白和猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的重组腺病毒疫苗。首先利用重叠PCR将GP5和E2基因通过口蹄疫病毒(FMDV)2A序列连接,形成一个完整的ORF,并将其克隆到腺病毒穿梭载体中,通过细菌内同源重组构建共表达PRRSVGP5蛋白和CSFVE2蛋白的重组腺病毒(rAdV-GP52AE2)。间接免疫荧光试验和western blot检测证实2个外源基因均获得表达。在小鼠上进行的免疫效力评价结果显示,rAdV-GP52AE2免疫组针对CSFV的中和抗体滴度可达1∶128,针对PRRSV的中和抗体滴度为1∶16;在淋巴细胞增殖试验中,免疫组与阴性对照组在增殖指数上有显著差异,表明该重组腺病毒可以同时诱导抗PRRSV和CSFV的特异性体液免疫和细胞免疫。这些结果显示,利用具有自动剪切功能的FMDV2A多肽构建的重组腺病毒有望开发成一种同时预防PRRS和CSF的新型载体疫苗。; 李宏宇孙元常天明贺番黄俊华仇华吉; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒重组腺病毒免疫原性

猪瘟兔化弱毒疫苗株适应家兔的分子基础: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种猪烈性传染病。我国在国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)中...; 李超李永锋申梁黄俊华孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒疫苗株病毒复制

猪瘟病毒Npro蛋白核仁穿梭及其对病毒复制的影响: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种烈性传染病。猪瘟病毒Npro 蛋白具有自我切割酶活性和抑制I 型干扰素产...; 李永锋申梁黄俊华李超李素孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒病毒复制

猪瘟兔化弱毒疫苗株适应家兔的分子基础: 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种猪烈性传染病。我国在国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020 年)...; 李超李永锋申梁黄俊华孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒疫苗株病毒复制