目的建立体外高表达细胞因子信号转导负调控蛋白3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的细胞模型,为进一步研究SOCS3在炎症因子信号通路中的作用机制提供研究手段。方法通过RT-PCR克隆SOCS3的编码片段,连接至pIRES2-EGFP真核表达质粒,经测序鉴定后,转染至293T细胞。通过荧光显微镜观测转染效率,RT-PCR和Western印迹法检测SOCS3表达情况,同时检测SOCS3高表达对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的信号转导和转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)磷酸化的影响。结果经测序证实,pIRES2-EGFP-SOCS3重建质粒中的SOCS3序列完全正确,转染后细胞中可见明显绿色荧光,且SOCS3在mRNA和蛋白水平表达均显著增加,过表达SOCS3可显著抑制由LPS诱导的STAT3的磷酸化。结论成功构建SOCS3基因重组质粒,转染293T细胞,获得高表达具有功能性SOCS3分子。该细胞模型建立为进一步研究SOCS3的调节机制提供了有利工具。
