王泳 作品数:7 被引量:27 H指数:3 供职机构: 天津商业大学生物技术与食品科学学院天津市食品生物技术重点试验室 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 生物学 医药卫生 更多>>
嗜酸乳杆菌胞外蛋白调控MAPK和PI3K-AKT信号途径关键蛋白活化水平 被引量:3 2017年 探讨并揭示嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6005分泌的相关蛋白质促进肠道健康及分子机制具有重要研究价值。本实验在确定了L.acidophilus CICC6005分泌的胞外蛋白抑制HT-29结肠癌细胞增殖的基础上,进一步探讨67 ku和37 ku的胞外蛋白通过何种途径发挥抑制结肠癌细胞增殖。研究以HT-29细胞作为靶细胞,用丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)和磷脂酰肌醇-3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B,PI3K-AKT)信号通路为考察对象,以Western Blotting为手段,分析两个通路中关键的靶点蛋白p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷酸化p38(phosphorylated p38,p-p38)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化的细胞外信号调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated AKT,p-AKT)、PI3K的表达水平,以探讨并阐述源于L.acidophilus CICC6005胞外蛋白调控结肠癌细胞增殖状况的分子机制。结果表明,不同质量浓度的67 ku和37 ku胞外蛋白分别作用HT-29细胞一定时间后,两种胞外蛋白均具有下调两个信号通路途径中p-ERK1/2、p-p38、p-AKT、PI3K蛋白的表达,且存在浓度依赖关系;但对p-JNK、ERK1/2、p38、JNK蛋白的表达没有影响。因此,源于L.acidophilus CICC6005分泌的37 ku和67 ku胞外蛋白表现出显著的抑制HT-29细胞增殖的功能,其机制可能与调控MAPK和PI3K-AKT两个信号通路中几个关键的靶点蛋白的活化水平相关。该研究结果提示,食用嗜酸乳杆菌其分泌的胞外蛋白质将达到维护肠道健康的目标。 王泳 贾彦 任效东 明珠 江岩 赵培 庞广昌 阎亚丽 陈庆森关键词:胞外蛋白 乳源酪蛋白糖巨肽对NF-κB信号通路中关键蛋白的调控作用 2017年 以结肠癌细胞HT-29为细胞系,在确定乳源性酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的HT-29细胞核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)亚单位p65蛋白影响的基础上,在最适作用时间条件下,利用Western blotting技术进一步检测乳源CGMP对NF-κB信号通路上关键蛋白IκBα、p-IκBα、E3RSIκB、UBC5表达水平的影响,以阐述乳源CGMP调控NF-κB信号通路中关键蛋白的作用机制。结果表明:乳源CGMP组的3种质量浓度(0.001、0.010、0.100?μg/m L)均可在一定程度上抑制LPS诱导的HT-29细胞NF-κB信号通路上IκBα蛋白的降解,0.100?μg/m L作用较为明显,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01)。研究明确地证实了乳源CGMP可通过抑制p-IκBα、E3RSIκB、UBC5蛋白的表达来抑制IκBα蛋白的降解,进而抑制NF-κB信号通路的激活。结论:乳源CGMP可显著降低NF-κB信号通路关键蛋白IκBα的降解,其机制是抑制了IκBα的磷酸化和泛素化,使p-IκBα和泛素化关键蛋白E3RSIκB和UBC5的表达均有所下降,进而减少了IκBα的降解,增加了IκBα-p65-p50蛋白三聚体的数量,使p65蛋白核移位效应降低,进而减少下游基因的表达。因此,研究结果科学地阐释了乳源CGMP是通过调控NF-κB信号通路发挥抗炎的作用。 王泳 龚建苗 贾彦 赵培 庞广昌 阎亚丽 陈庆森关键词:酪蛋白糖巨肽 结肠癌细胞 核因子-ΚB 瑞士乳杆菌TS206对小鼠血脂及粪便胆汁酸水平的调控影响 被引量:2 2017年 探讨瑞士乳杆菌TS206(Lactobacillus helveticus TS206)对小鼠血脂水平的影响。以健康BABL/c小鼠为对象,设置实验组和对照组,分别以L.helveticus TS206菌悬液和生理盐水(0.2 m L/d)连续灌胃7周,监测小鼠体质量和血脂(总胆固醇(total serum cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)水平、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C))以及粪便总胆汁酸(total bile acid,TBA)水平的变化。灌胃L.helveticus TS206后,小鼠体质量增量显著高于对照组(P<0.05,P<0.01);血清中TC、TG和LDL-C水平均显著降低(P<0.05),灌胃停止1周后基本恢复到对照组水平;L.helveticus TS206菌悬液和生理盐水小鼠血清中HDL-C含量均无显著性变化;TBA水平呈先下降后上升趋势,且3周后TBA水平显著低于对照组(P<0.05)。研究结果表明,L.helveticus TS206能促进健康小鼠体质量增加,并有效调控其血脂水平,提示口服L.helveticus TS206菌剂可能会降低患心脑血管疾病的风险。 王泳 叶雷 贾彦 庞广昌 赵培 闫亚丽 陈庆森关键词:血脂 总胆汁酸 心脑血管疾病 球磨-CTAB法提取嗜酸乳杆菌基因组DNA条件优化 被引量:5 2018年 [目的]以嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)为试验菌株,寻找一种高质量、高稳定性的细菌基因组DNA的提取方法。[方法]采用球磨-十六烷基三甲基溴化铵(Cetyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)法提取细菌基因组DNA,通过调整研磨珠直径、菌体量、破碎时间三因素对DNA提取效果进行正交优化。[结果]确定最佳优化条件为破碎时间3.5 min、菌体量9×10~8CFU/m L、研磨珠直径0.1 mm。[结论]经条件优化后的球磨-CTAB法短时间内可获得高质量的细菌DNA产品,处理量大、方便快捷。 臧凯丽 王泳 赵林森 闫亚丽 崔文静 马新颖 赵培 陈庆森关键词:嗜酸乳杆菌 基因组DNA 乳源酪蛋白糖巨肽作用人结肠癌细胞HT-29调控炎症活力研究 2017年 为进一步阐释乳源酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)的抗炎及修复肠道炎症的功效,本研究在确定了乳源CGMP对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的结肠癌细胞HT-29NF-κB亚单位p65蛋白的影响和乳源CGMP调控核转录因子(nuclear factor,NF)-κB信号通路的基础上,通过构建表达乳源CGMP和NF-κB必需调节蛋白(NF-κB essential modulator,NEMO)的质粒,共转HT-29细胞,免疫共沉淀测定两个蛋白的相互作用。最后采用线粒体膜电位法测定乳源CGMP对HT-29细胞的促凋亡作用。结果表明,乳源CGMP与NEMO(NF-κB essential modulator)30 h共转HT-29细胞中,乳源CGMP与NEMO蛋白均表达,且表现出二者的相互作用。乳源CGMP可与NEMO相互作用影响NF-κB信号通路;同时乳源CGMP还促进HT-29细胞凋亡,呈时间依赖性,其中0.1μg/m L的CGMP作用效果最好。乳源CGMP与NEMO相互作用是间接作用于IκB激酶(IκB kinase,IKK)而作用于?IκB,进而影响NF-κB信号通路。研究揭示了乳源CGMP调控NF-κB信号通路的另一种途径,也充分说明乳源CGMP可通过作用多种抗炎途径发挥其调控作用。 王泳 龚建苗 贾彦 阎亚丽 庞广昌 赵培 陈庆森关键词:酪蛋白糖巨肽 结肠癌细胞HT-29 细胞凋亡 瑞士乳杆菌调控小鼠肠道菌群变化规律的研究 被引量:10 2018年 为探究瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)TS206对小鼠肠道菌群的调控规律,更好地阐述益生菌维持肠道菌群稳态的机制,本研究以雄性BALB/c小鼠为实验对象,将其分为L.helveticus TS206组、对照组、空白组。L.helveticus TS206组和对照组分别每天灌胃L.helveticus TS206菌悬液和等量的生理盐水,连续灌胃7周,空白组不灌胃。每周采集小鼠新鲜粪便样品,通过试剂盒提取粪便细菌总DNA,利用Ion torrent个人化操作基因组测序平台测序技术对16S r RNA基因的V6区进行高通量测序,最后通过生物信息学和多变量统计学方法对测序数据进行分析。结果显示:所有测序序列在97%相似水平划分得到1 617个操作分类单位(operational taxonomic units,OTUs),被划分为8个门,硬壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)为各组小鼠中的优势菌门,占总序列数的97.49%,且硬壁菌门丰度最高,超过70%;优势菌科主要为S24-7、毛螺菌科(Lachnospiraceae)、瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)、理研菌科(Rikenellaceae)和拟杆菌科(Bacteroidaceae),且与对照组相比L.helveticus TS206组肠杆菌科细菌数量较低并呈下降趋势。经LEf Se分析有53个关键OTUs与2组小鼠肠道粪便菌群结构显著相关,其中27个OTUs在对照组中富集,分属于肠杆菌科、瘤胃球菌科、毛螺菌科和梭菌目;26个OTUs在L.helveticus TS206组中富集,分属于梭菌目、毛螺菌科和拟杆菌属,其中与对照组相比,梭菌目丰度水平高。经主成分分析,两组样品完全分离,菌群的整体结构存在差异,且富集的OTUs之间呈负相关关系。综上所述,在实验阶段,灌胃雄性BALB/c小鼠一定剂量的L.helveticus TS206后,经扩增子测序分析获得的初步结论为L.helveticus TS206能改变肠道菌群整体结构的功效,表现出了抑制肠道有害微生物生长的作用,并通过促进部分有益菌的增殖来维持肠道菌群结构的稳态。 臧凯丽 贾彦 崔文静 马新颖 王泳 赵林森 赵培 叶雷 阎亚丽 陈庆森关键词:生物信息学 益生菌胞外蛋白与肠道粘膜免疫细胞互作关系的研究进展 被引量:7 2018年 近期国内外研究证实了益生菌分泌的胞外蛋白具有增强粘膜屏障、调节免疫、维持肠道稳态的功能,在一定程度上可以改善、缓解和治疗肠道疾病。益生菌分泌的胞外蛋白对肠粘膜免疫作用及对机体健康的影响的相关阐述已成为人们关注的热点,为探究益生菌对肠粘膜屏障及粘膜免疫信号通路的功能表现的分子基础,本文首先概括肠粘膜系统及其免疫机制和益生菌分泌胞外蛋白的作用,然后重点介绍国内外对分泌胞外蛋白的益生菌的相关研究进展,并指出胞外蛋白将在一定程度上打通肠粘膜免疫信号通路途径,发挥治疗肠道疾病的作用,从而达到维护肠道健康的目的,也为解决肠道健康问题提供了一条可行的途径。 臧凯丽 任效东 王秋萍 王泳 阎亚丽 赵培 赵林森 刘爱国 陈庆森关键词:益生菌 胞外蛋白 肠道