杨凡
- 作品数：19 被引量：35H指数：3
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：四川省科技支撑计划长江学者和创新团队发展计划国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一例多种病毒混合感染的实验室诊断及综合防制措施被引量：1
- 2016年
- 2016年3月,彭州某猪场出现疑似猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)混合感染严重疫情,猪群发病率和死亡率较高。为进一步确诊和提供科学的防控依据,采集10头繁殖障碍母猪(未曾注射PRRSV疫苗)血样,用IDEXX试剂盒进行猪瘟病毒(CSFV)、PRRSV和PRVgE抗体检测。同时采集2头流产胎儿(对应2头流产母猪)组织分别进行CSFV、PRRSV的RT-PCR检测和PRV gE的PCR检测,采集2头腹泻同时伴随神经症状的仔猪组织进行TGEV、PEDV、猪轮状病毒(RV)的RT-PCR检测和PRV gE的PCR检测。结果显示,母猪CSFV抗体阳性率达90%,对应流产胎儿未检出CSFV,表明无CSFV感染,免疫合格;PRRSV和PRV gE抗体阳性率达100%,对应流产胎儿均测出PRRSV和PRV,表明这两种病毒感染情况严重;2头仔猪PCR和RT-PCR结果提示均有PRV、PEDV和TGEV野毒感染,并根据以上检测结果提出紧急防控措施。
- 杨凡李萍樊毅赵军陈盼朱玲徐志文
- 关键词：PRRSVPRVTGEVPEDV
- 2014—2016年四川省猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征病毒的血清学调查被引量：6
- 2017年
- 为掌握近年来四川省现有防控体系下猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的感染和流行情况,对2014年1月—2016年6月采集于四川省共16个地区的6 489份血样,运用ELISA方法进行CSFV和PRRSV血清学调查。结果显示,2014—2016年CSFV抗体阳性率分别为78.70%、80.25%和82.08%,PRRSV抗体阳性率分别为75.97%、87.16%和88.31%;绵阳、眉山、乐山和宜宾等地的CSFV或PRRSV抗体水平低于60%,与另一种相比差异较大,可能存在免疫干扰或野毒感染;哺乳仔猪和断奶仔猪的CSFV抗体阳性率偏低,各日龄段猪群PRRSV抗体水平较理想。结果提示,四川地区猪群的CSFV、PRRSV抗体阳性率良莠不齐,有必要对饲养管理方式和免疫程序等做适当调整,以防控临床野毒的感染。
- 杨凡吕文婷许思遥毛汐语殷玥徐志文
- 关键词：猪瘟猪繁殖与呼吸综合征ELISA血清学调查
- 猪伪狂犬病毒SC株的分离鉴定及生物信息学分析
- 引言猪伪狂犬病毒(PRV)可引起妊娠母猪繁殖功能障碍和初生仔猪神经症状,仔猪感染率和死亡率高达100%。自2011年以来,猪伪狂犬病的报道有增多趋势,出现了接种了疫苗不能提供完全保护的现象,涉及我国多个省、市、地区的猪场...
- 刘小琬周远成杨凡刘鹏娟卓秀萍朱玲徐志文
- 文献传递
- 伪狂犬病毒gE、gI和US9三基因缺失株的构建
- 2017年
- 伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)是一种疱疹病毒,在自然界具有极广泛的宿主类群,是中国养猪业发展主要威胁之一。为了研究病毒的神经传导机制,实验采用Lipofectamine3 000转染试剂,将PP63质粒与伪狂犬病毒Fa株基因组DNA共转染BHK-21细胞,空斑筛选得到gI/gE/US9重组缺失病毒,并命名为SA215-T。采用PCR、基因测序、Western Blot、电镜检查和生长曲线测定等方法检测重组病毒PRV-SA215-T。研究结果显示,Western Blot未发现gE基因的表达,SA215-T株的电镜形态与野毒株无明显差异,SA215-T株与亲本毒株Fa株在细胞中的生长曲线差异不明显且均达到了较高的病毒滴度。
- 樊毅李碧郭万柱李萍黄剑波杨凡姜子义赵军许思遥邓益超殷玥毛汐语吕雯婷徐志文朱玲
- 关键词：重组病毒基因缺失
- PEDV、TGEV、RV和PToV多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用
- 引言自2011年以来猪腹泻病广泛流行于我国各地,患病仔猪发病率、死亡率均可高达80%以上,给养猪业造成了严重经济损失。猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis,TGE),猪流行性腹泻(P...
- 刘小琬周远成杨凡方和俊郭博蔡雨函徐志文
- 文献传递
- 一例猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及综合防治措施被引量：2
- 2016年
- 无菌采集疑似猪伪狂犬病病猪脑组织，进行病毒的分离鉴定。经PCR检测为阳性的病料接种PK-15细胞进行病毒分离，将所分病毒暂命名为SC株。蚀斑实验测定病毒滴度，并采用PCR和琼扩实验对其进行进一步鉴定。结果：PRV阳性病料接种PK-15细胞，传至第5代后产生稳定细胞病变，主要表现为细胞变圆、变亮、聚堆且可见典型的空斑，而对照组细胞贴壁生长良好；基于PRVgE基因的PCR检测，扩增产物为378bp，与预期目的条带一致；用病毒蚀斑技术测定该分离株的滴度为2.65×104PFU／mL；琼扩实验显示病毒原液至32倍稀释后均能与PRV阳性血清形成可见沉淀线。以上结果均表明所送检病猪为PRV阳性，据此为猪场提出综合防治措施。
- 杨凡徐志文李萍方和俊郭博周远成
- 关键词：猪伪狂犬病病毒
- 免疫组化检测伪狂犬病毒感染大鼠后在其组织中分布规律的研究
- 2017年
- 伪狂犬病毒(PRV)能够感染神经元细胞并且跨突触传播,该特性使它成为了一种新兴的神经示踪病毒。为探究PRV在动物体内分布情况,本研究构建了PRV人工感染大鼠模型,通过免疫组化技术检测了PRV在大鼠体内各组织器官中的增殖分布情况,同时还将免疫组化检测结果与PCR检测结果相比较。结果表明利用免疫组化技术分别在PRV感染72 h、78 h、84 h、96 h、104 h、108 h后开始依次在大鼠的脑、肺、肾、脾、肝、心检测到PRV。同时在总计36个PRV检测样品中,PCR检测的检出率为50%,免疫组化检测的检出率为36%,两者的符合率为72%。本研究利用免疫组化技术观察PRV感染大鼠后在体内增殖分布规律和病变程度,为进一步探索RV的组织嗜性以及机体抗病毒作用机制奠定基础。
- 樊毅刘洪亮李萍黄剑波杨凡姜子义赵军许思遥邓益超殷玥毛汐语吕雯婷杨泽晓徐志文朱玲
- 关键词：伪狂犬病病毒大鼠模型免疫组化
- 猪环曲病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用被引量：1
- 2015年
- 为建立快速检测猪环曲病毒(PToV)的RT-LAMP方法,根据GenBank中发表的N蛋白基因序列,设计合成4条特异性LAMP引物,通过敏感性试验和特异性试验,建立了PToV RT-LAMP检测方法,并对71份临床粪便进行了检测应用。结果显示,本试验建立的PToV RT-LAMP检测方法在65℃60min条件下可扩增出特异性梯状DNA条带,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪细小病毒、猪环曲病毒的核酸无交叉反应;检测极限为10copies/μL,比普通RT-PCR的灵敏度高10倍,表明该检测方法具有较强的特异性及灵敏性。用建立的RT-LAMP方法进行的样品检测结果显示,受检的71份样品中有17份检测结果为阳性,该结果与常规RTPCR检测结果吻合,总的阳性率为23.9%。
- 刘小琬蔡雨函周远成杨凡刘鹏娟黄剑波方和俊朱玲徐志文
- 关键词：RT-LAMP
- PADV3自然感染猪组织中病毒含量的实时荧光定量PCR检测被引量：1
- 2017年
- 为了解猪腺病毒3型(PADV3)在自然感染猪体内不同器官组织中的分布情况,利用实时荧光定量PCR检测方法,定量检测了自然感染PADV3的仔猪、妊娠母猪以及与猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染的仔猪不同器官组织中PADV3病毒的含量。结果,在感染的猪体多种器官组织中均可检测到PADV3,但是在各器官组织中病毒的含量有差异,其中肠黏膜、肺组织、肠系膜淋巴结、扁桃体中病毒含量较高,心、肝、脾组织中病毒含量较低;在同时混合感染PCV2的仔猪肺组织、肠系膜淋巴结、扁桃体中PADV3含量显著增加。结果表明,PADV3对猪肠黏膜、肺组织、肠系膜淋巴结、扁桃体有较强的嗜性,对心、肝、脾组织的嗜性相对较弱;PCV2混合感染可促进PADV3在仔猪体内的增殖,能增强PADV3对感染器官组织的亲嗜能力。
- 吕雯婷方和俊赵军李萍许思遥杨凡徐志文朱玲
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 猪萨佩罗病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：7
- 2015年
- 为建立猪萨佩罗病毒（PSV）的检测方法,根据GenBank中PSV的5′端非编码区基因的保守序列设计并合成1对针对PSV的特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅡ检测PSV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能很好地将PSV与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪嵴病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒区分开,特异性强。检测下限为6.37×10^2 copies/μL,比普通PCR敏感100倍,敏感性高。扩增产物的熔解曲线分析只有1个单特异峰。所建立的实时荧光定量RTPCR的批内变异系数为0.44%～1.14%,批间变异系数为0.70%～1.32%,重复性较好。应用该方法对采集自四川省部分地区的58份有腹泻症状的猪粪便进行检测,实时荧光定量RT-PCR检测阳性率为56.9%,与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。结果表明,本研究建立的实时荧光定量RT-PCR特异性较强、灵敏度高,可用于该病毒的临床检测、定量分析及流行病学调查。
- 郭博方和俊刘小琬杨凡刘鹏娟黄剑波李萍徐志文朱玲
- 关键词：SYBR实时荧光定量RT-PCR
