杨鹤
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：东北农业大学食品学院乳品科学教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部重点实验室开放基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- N-乙酰神经氨酸醛缩酶基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：1
- 2015年
- 以大肠杆菌TG1的染色体总DNA为模板,通过引物设计和PCR扩增,克隆获得编码Neu5Ac醛缩酶基因(nanA)的片段;以p ET28(b)构建的nanA基因重组质粒p ET28(b)-nanA转化大肠杆菌BL21(DE3),达到高产N-乙酰神经氨酸醛缩酶的目的。在得到的转化子大肠杆菌BL21(DE3)/pNA1中,nanA基因受lac启动子控制,为IPTG或乳糖所诱导表达。此工程菌产酶量在浓缩后达到6.13mg/m L。
- 李春戚晓熙杨鹤龚雅丽祁昕梁婉婷刘丽波
- 关键词：大肠杆菌工程菌基因表达
- 德式乳杆菌保加利亚亚种分解代谢控制蛋白CcpA基因敲除突变株的构建被引量：1
- 2016年
- 在革兰氏阳性菌中,分解代谢控制蛋白(Ccp A)是一种参与碳代谢和氮代谢的多效调控蛋白。利用同源重组技术,以德式乳杆菌保加利亚亚种为研究对象,构建Ccp A基因敲除突变株。首先以德式乳杆菌保加利亚亚种ATCC11842基因组DNA和质粒p BR322为模板,扩增Ccp A基因和四环素抗性基因(Tet),然后分别将Ccp A基因和Tet基因连接到载体p Back Zero-T Vector上,再对中间载体p Back Zero-Ccp A和p Back Zero-Tet进行双酶切,回收纯化双酶切后的目的片段并连接获得Ccp A基因敲除的重组载体p CT。通过同源重组筛选Ccp A基因敲除突变株,菌落PCR和测序鉴定结果均显示Ccp A基因敲除突变株构建成功,这为阐明该调控蛋白在德式乳杆菌保加利亚亚种代谢过程中的作用奠定了基础。
- 孙金威刘丽波祁昕杨鹤龚娅莉李春
- 关键词：基因敲除突变株
