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单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)对蛋白酶体α7亚基(PSMA7)蛋白稳定性的影响: 2016年; 目的研究单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)对蛋白酶体α7亚基(PSMA7)蛋白稳定性的影响。方法通过重组PCR方法将663位天冬氨酸突变为丙氨酸,构建Mps1激酶活性缺失的突变体(pc DNA3-Flag-Mps1KD),并通过免疫印迹实验检测其是否能成功表达。采用免疫印迹实验检测Mps1及Mps1KD对PSMA7蛋白稳定性的影响;通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测Mps1及Mps1KD对PSMA7 RNA表达水平的影响。结果免疫印迹结果证实构建的突变质粒Mps1KD能正确表达且野生型Mps1可明显增强PSMA7稳定性,而Mps1KD则不能;加入Mps1激酶活性抑制剂后,降低PSMA7稳定性;RT-PCR检测结果发现Mps1及Mps1KD对PSMA7 RNA表达水平无影响。结论成功构建了Mps1激酶活性缺失突变体真核表达质粒pc DNA3-Flag-Mps1KD,并在293T细胞中得到了表达;研究还发现Mps1通过其激酶活性可增强PSMA7蛋白稳定性,但对其RNA表达水平无影响,为进一步研究Mps1对蛋白酶体功能影响及对肿瘤发生发展奠定基础。; 张萍萍王鹏皓曹源魏从文何湘钟辉胡成进; 关键词：蛋白酶体稳定性

BPOZ抑制乳腺癌细胞系增殖的初步研究: 2016年; 目的研究BTB/POZ(broad complex,tramtrack and bric a brac/poxviruses and zinc finger)基因对乳腺癌细胞系增殖能力的影响。方法以人脾脏c DNA文库为模板,p CMV-HA-Vector为载体,构建真核表达载体p CMV-HA-BPOZ;免疫印迹实验鉴定重组蛋白p CMV-HA-BPOZ的表达;细胞生长实验检测BPOZ对细胞增殖能力的影响;平板克隆实验检测BPOZ对细胞生长能力的影响。结果免疫印迹实验结果证实,构建的真核表达载体p CMV-HA-BPOZ能正确表达;过表达HA-BPOZ可显著抑制MCF7和ZR-75-1细胞的增殖和生长。结论成功构建了真核表达载体p CMV-HA-BPOZ,并在细胞中成功表达;BPOZ可明显抑制MCF7和ZR-75-1细胞的增殖和生长能力,为进一步研究BPOZ在乳腺癌发生发展中的作用打下基础。; 王鹏皓张萍萍魏从文张艳红马胜利曹叶朱永杰何湘钟辉; 关键词：乳腺肿瘤细胞增殖

雌激素受体α磷酸化位点突变体T224A和S559A的构建及其转录激活活性检测: 2015年; 目的:构建雌激素受体α(ERα)T224A和S559A磷酸化位点突变体载体,在HEK293T细胞中检测其表达及突变体生物活性的改变。方法:以pc DNA3-Flag-ERα为模板,通过重组PCR技术扩增目的基因片段并突变碱基,插入pc DNA3-Flag载体;将构建的质粒转染HEK293T细胞进行瞬时表达,通过Western印迹检测融合蛋白的表达,采用萤光素酶报告基因方法检测ERα突变体的活性改变。结果:T224A和S559A磷酸化位点突变体在HEK293T细胞中得到表达,相对分子质量为66×103。在无雌激素(E2)时,野生型ERα及T224A和S559A突变体的转录活性分别为空载体的1.94、1.49和1.84倍;在雌激素存在时,野生型ERα活性增强了1.57倍,T224A和S559A突变体活性分别增强了0.54和0.61倍。结论:224位Thr磷酸化修饰对ERα的活性起重要作用,且2个磷酸化位点突变体受雌激素调控减弱。; 陈伟周鹏宇朱永杰马胜利曹叶张萍萍何湘魏从文钟辉吴飞翔; 关键词：雌激素受体Α 磷酸化突变体雌激素转录激活活性

论联合培养和实验平台共享在医学研究生教育中的作用和管理被引量：8: 2019年; 在医学研究生人才培养中,联合培养与实验平台共享可以明显提高研究生的科研素养,增强其创新能力;同样也可以促进导师间合作,拓展思路;充分利用双方的实验设备和教育资源,促进资源共享,提高仪器和设备的使用效率。; 苏建荣张萍萍; 关键词：医学研究生

单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)与蛋白酶体α7亚基(PSMA7)相互作用研究: 2015年; 目的研究单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)与蛋白酶体α7亚基(PSMA7)是否存在蛋白间相互作用。方法以真核表达质粒p CMV-C-Myc-PSMA7为模板,p GEX-4T-1为载体,构建原核表达载体p GEX-4T-1-PSMA7(GSTPSMA7);并通过GST pull-down及免疫共沉淀实验检测Mps1与PSMA7之间是否存在相互作用。结果免疫印迹实验结果证实,构建的原核表达载体p GEX-4T-1-PSMA7(GST-PSMA7)能正确表达;GST pull-down及免疫共沉淀实验表明,Mps1与PSMA7之间存在蛋白质间相互作用。结论成功构建了原核表达载体p GEX-4T-1-PSMA7(GSTPSMA7),并在大肠杆菌中得到了表达;Mps1与PSMA7之间存在相互作用,为进一步研究两者之间的关系及Mps1功能的影响打下基础。; 张萍萍王鹏皓曹源魏从文何湘曹叶马胜利张艳红钟辉胡成进; 关键词：蛋白质相互作用

RNF34调控天然免疫的初步研究: 2017年; 目的研究环指蛋白34(RING finger protein 34,RNF34)对天然免疫的调控。方法利用重组PCR方法构建pcDNA3-Flag-RNF34、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔFYVE、pcDNA3-Flag-RNF34-ΔCID和pcDNA3-Flag-RNF34-ΔRING质粒,并在HEK293T细胞中瞬时表达;利用双荧光素酶报告基因技术检测RNF34及其3种突变体对仙台病毒(SeV)和N-RIG-Ⅰ激活NF-κB和IFN-β转录活性的影响。结果成功构建了Flag-RNF34及其3种结构域缺失突变体的真核表达质粒;发现在SeV刺激下,RNF34对NF-κB和IFN-β转录活性有明显抑制作用,RNF34-ΔFYVE、RNF34-ΔCID和RNF34-ΔRING与RNF34相比此种抑制作用减弱。同时发现对于N-RIG-Ⅰ激活的NF-κB和IFN-β活性,RNF34及其3种结构域缺失突变体也有相似的抑制作用。结论 RNF34通过负调控RIG-Ⅰ-MAVS信号通路调控天然免疫。; 朱永杰张萍萍周鹏宇王鹏皓陈健康田茵茵何湘钟辉; 关键词：NF-ΚB 干扰素Β

海洋创伤弧菌LAMP快速诊断方法的建立与评价被引量：4: 2016年; 目的利用环介导等温扩增(LAMP)技术,建立海洋创伤弧菌快速、简便、特异且敏感的检测方法,并对该方法的特异性和灵敏度进行评价。方法选取海洋创伤弧菌溶细胞素(vvhA)基因作为靶基因,根据GenBank公布的序列设计4条LAMP引物;对47株细菌(包括20株弧菌属细菌)进行LAMP和聚合酶链式反应(PCR)扩增,并做特异性比较;对创伤弧菌M06株增菌液10倍倍比稀释,提取DNA后进行灵敏度的检测,并与常规PCR作比较;构建含vvhA基因片段的重组质粒,作为LAMP反应体系的标准阳性对照。结果常规PCR实验出现假阳性结果,而LAMP实验只有海洋创伤弧菌出现阳性扩增,其他样品均为阴性,无假阳性和假阴性结果,表明引物的特异性较好,加入钙黄绿素和电泳结果相一致;针对vvhA基因建立的LAMP技术其最低检测下限为每个反应4×10CFU,是常规PCR(每个反应4×10~2 CFU)的10倍,呈现较好的灵敏度。重复实验过程两遍,PCR和LAMP技术检测结果稳定。结论建立了一种用于检测海洋创伤弧菌的LAMP检测方法,该方法特异性强,灵敏度高,方便快捷,特别适合用于现场和床旁的快速检测。; 张丽娜王明义杨小蕾曹源张萍萍胡成进; 关键词：创伤弧菌环介导等温扩增聚合酶链式反应

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在临床微生物检测和鉴定中的应用被引量：1: 2014年; 现今临床主要通过观察细菌菌落形态、革兰染色、显微镜检查，以及各种生化试验等方法对致病菌进行检测和鉴定。这些方法主要依赖致病菌的生长代谢，其周期较长，并且带有一定的主观性［1］，不能满足临床上对致病菌进行快速诊断的需要。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ matrix assisted laser desorption／ionization time-of-fight mass spectrometry ， MALDI-TOF MS）的诞生和发展奠定了用蛋白质指纹图谱鉴定微生物的基础。通过检测未知微生物的蛋白质指纹图谱并与质谱图数据库中特征性谱图进行比对，从而对待测微生物进行快速鉴定。该技术具有速度快，灵敏度高，操作简单，信息直观，成本低廉等特点，在对病原微生物进行快速鉴定方面具有良好的应用前景。; 宗玉龙曹源褚芳波张萍萍胡成进; 关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱微生物

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张萍萍

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