杜邦
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- 放线菌素D处理V79细胞的条件培养液对旁观者细胞p53 mRNA和蛋白表达及细胞周期的影响
- 2012年
- 目的：观察放线菌素D（actinomycin D,ACTD）处理V79靶细胞获得的条件培养液（conditioned medium,CM）对V79旁观者细胞p53mRNA和蛋白表达及细胞周期的影响,以研究ACTD诱导旁观者效应发生的可能机制。方法：4.0mg/LACTD处理V79靶细胞1h,PBS洗3次,加入新鲜培养液后开始计时,分别在第4、8、12和24h获取靶细胞不同时段的CM。用不同时段CM培养正常V79细胞24h后,分别采用RT-PCR检测旁观者细胞中p53的mRNA水平;免疫组化法检测p53蛋白的表达;流式细胞术测定旁观者细胞的细胞周期分布。结果：与对照组比较,p53mRNA水平在4、8和24hCM处理组均增加（P〈0.01）,在4～12hCM时段,p53mRNA水平随着时段的延后呈逐渐降低趋势,12h组降至最低,与阴性对照的水平接近（P〉0.05）。各CM处理组p53蛋白平均灰度值和积分光密度,除12hCM组外均较对照组显著增加（P〈0.05）。随着时段的延后（4~12h）,p53蛋白表达逐渐减少,12h组降至最低,与阴性对照间的差异无统计学意义（P〉0.05）,p53蛋白表达与p53mRNA表达结果一致。不同时段CM处理组旁观者细胞G0/G1期比阴性对照组增多（P〈0.05）,4hCM组增加最明显;各CM处理组S期细胞均较阴性对照组减少（P〈0.01）,但组间差异无统计学意义（P〉0.05）;而G2/M期细胞在4hCM组下降明显,与阴性对照间的差异有统计学意义（P〈0.01）;8~12h逐渐增加,12h组接近对照水平（P〉0.05）;24h又下降,与阴性对照间的差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：ACTD诱导旁观者效应可能是通过靶细胞的CM影响旁观者细胞p53mRNA和蛋白的表达,并影响细胞周期的进展而引起的,以4hCM诱导的效应最强。
- 靳翠红巫生文刘秋芳逯晓波杜邦张倩蔡原
- 关键词：放线菌素D条件培养液P53细胞周期
