黄巧玲
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源血管内皮生长因子突变体Ⅱ的克隆表达、分离纯化及初步鉴定
- 2013年
- 构建人源血管内皮生长因子突变体hVEGF121Ⅱ的重组原核表达质粒,获得hVEGF121Ⅱ蛋白用于制备抗血管生成作用更强的抗肿瘤疫苗。利用PCR技术,在已构建的hVEGF121Ⅰ突变体的基因末端引入热休克蛋白mHSP70的407-426两段串联重复序列的编码基因,PCR产物经Hind III和Nco I双酶切后连接到经同样限制性内切酶切过的原核表达载体pET-28a(+)上,转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,乳糖诱导表达,超声破碎菌体,包涵体经洗涤、溶解、稀释复性、离子交换层析得到目的蛋白hVEGF121Ⅱ,Western-blot鉴定。结果成功构建了hVEGF121Ⅱ蛋白的表达质粒pET-28a(+)-hVEGF121Ⅱ,重组菌株经乳糖诱导后,目的蛋白表达量占全菌蛋白的62%,分离纯化后纯度达到95%,hVEGF121Ⅱ蛋白的单体和二聚体都可以和VEGF抗体结合。重组hVEGF121Ⅱ蛋白的表达成功为进一步对其进行免疫学研究奠定了基础。
- 曹荣月张鹏徐茂磊陈檬邢芸胡晓利黄巧玲
- 关键词：血管内皮细胞生长因子突变体抗血管新生包涵体
- 肿瘤细胞裂解物疫苗与其修饰的树突状细胞联合抗A20鼠淋巴瘤的作用被引量：3
- 2013年
- 将A20淋巴瘤细胞,反复冻融,获得肿瘤细胞裂解物的抗原肽,以来源于结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）热休克蛋白70（HSP70）第407-426（mHSP70407~426,M）的两段串联重复序列M2小肽为佐剂,通过双功能偶联试剂戊二醛偶联制备肿瘤细胞疫苗A20-M2,偶联产物在体外修饰未成熟的DC,通过检测负载肿瘤细胞抗原的DC细胞分泌的细胞因子以及抗原来确定被修饰DC细胞的成熟度,获得成熟DC即获得DC疫苗。用A20-M2与DC两种疫苗联合给药治疗小鼠,实验结果显示,激发的免疫应答对于A20肿瘤攻击起到有效的保护作用,与PBS阴性对照组比较,平均肿瘤重显著降低（P〈0.01）,通过ELISA法,从小鼠血清中检测到高滴度抗细胞裂解物类抗体,淋巴细胞增殖试验显示疫苗联合给药后能够有效的刺激脾淋巴细胞的增殖反应。A20-M2能够有效的刺激DC细胞成熟,A20-M2与成熟DC细胞联合给药能够有效的抑制小鼠A20淋巴瘤的生长。
- 曹荣月李飞邢芸徐茂磊陈檬张鹏汤啸天黄巧玲
- 关键词：疫苗树突状细胞生物治疗
