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吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007高GC基因PCR体系的扩增研究被引量：1: 2017年; 对生防菌吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007基因组上高GC基因PCR扩增体系进行探讨。通过对该菌株基因组进行100℃处理5 min;PCR反应体系为10μL,在体系中使用高保真LA Taq(Mix)酶,并分别加入不同体积分数的DMSO、2×GC bufferⅠ、2×GC bufferⅡ,然后选用适当的PCR程序对产几丁质酶基因(bcc1,GC含量71.1%)进行扩增,在此基础上,选择最适体系对产ACC脱氨酶基因(acd S,GC含量66.86%)、内切葡聚糖酶基因(GC含量74.71%)、色氨酸单加氧酶基因(iaa M,GC含量6.62%)、嗜铁素合成相关基因(cepR,GC含量64.44%)进行PCR扩增,将扩增出的片段与PMD19-T vector连接后转化至大肠杆菌JM-109中进行测序。结果表明:JK-SH007菌株基因组经高温处理后,在PCR反应体系中加入10%DMSO可成功扩增出该菌株bcc1基因(2 484 bp)。该体系同样适用于acd S、内切葡聚糖酶、iaa M、cepR等基因,而且测序结果与预期的序列一致。因此,该体系具有广泛性,而且简单可靠,成本低,扩增效率高,具有很强的实用性,为洋葱伯克霍尔德氏菌群菌株及其他菌株高GC含量基因的克隆提供了参考依据。; 张鹏飞吴伟陈飞飞叶建仁任嘉红; 关键词：测序 PCR扩增

一种适用于吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007的转化方法: 本发明公开了一种适用于吡咯伯克霍尔德氏菌JK‑SH007的高效转化方法，包括：1)取感受态细胞，冰浴融化；2)取pHKT2质粒加入含感受态细胞混匀，冰浴15～75min；3)液氮冷冻30～150sec，32～42℃水浴1...; 叶建仁陈飞飞刘婉慧吴学连黄金思; 文献传递

一种吡咯伯克霍尔德氏菌形成生物膜的方法: 本发明公开了一种吡咯伯克霍尔德氏菌形成生物膜的方法，包括以下步骤：1)采用LB固体平板活化吡咯伯克霍尔德氏菌JK‑SH007菌种，获得单菌落，挑取单菌落进入LB液体培养基，180r/min，28℃纯培养24h，获得菌悬液...; 叶建仁付欢欢陈飞飞刘婉慧方雪琦王朝恩; 文献传递

一种基于反复冻融方式的基因组DNA提取方法: 本发明公开了一种基于反复冻融方式的基因组DNA提取方法，向提取细胞培养物(细菌，真菌，线虫等)加入提取缓冲液，混匀后反复冻融两次，加入RNase 37℃孵育10min，再加入5M NaCl和10％SDS充分混匀后，再次冻...; 叶建仁陈飞飞刘婉慧王俊伟唐旭黄金思; 文献传递

一种冷适应性内切β-1,4-葡聚糖酶及其表达基因和应用: 本发明公开了一种冷适应性内切β‑1,4‑葡聚糖酶及其表达基因和应用，所述的冷适应性内切β‑1,4‑葡聚糖酶的氨基酸序列如 SEQ ID NO.1所示，其表达基因的核苷酸序列如 SEQ ID NO.3所示。本发明采用PCR...; 叶建仁陈飞飞王立超郗蓓蓓刘婉慧; 文献传递

一种促进拟茎点霉产生大量分生孢子的方法: 本发明公开了一种促进拟茎点霉产生大量分生孢子的方法，包括：1)采用PDA培养基在固体平板上活化拟茎点霉菌种，获得到菌丝体；2)采用打孔法取步骤1)的菌丝体接种于装有PDA培养基的培养皿中，置于黑暗培养箱培养；3)待拟茎点...; 叶建仁陈飞飞付欢欢吴学连朱明龙方雪琦薛飞扬; 文献传递

一种吡咯伯克霍尔德氏菌形成生物膜的方法: 本发明公开了一种吡咯伯克霍尔德氏菌形成生物膜的方法，包括以下步骤：1)采用LB固体平板活化吡咯伯克霍尔德氏菌JK‑SH007菌种，获得单菌落，挑取单菌落进入LB液体培养基，180r/min，28℃纯培养24h，获得菌悬液...; 叶建仁付欢欢陈飞飞刘婉慧方雪琦王朝恩

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陈飞飞