王改改
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：湖州师范学院生命科学学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目浙江省公益性技术应用研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 转基因鱼的应用前景
- 2012年
- 鱼类是人类食物的重要来源,人们一直在寻求和培育生长快、抗病力强的鱼类品种,基因转移技术的应用为达到这一目的开辟了一条新的途径。外源基因导入鱼体中后,可以加快其生长速度,提高抗寒性和抗病性等,在水产养殖中有着广阔的应用价值。
- 江晨王改改刘莉采克俊
- 关键词：转基因鱼
- 草鱼抗病毒基因Mx全长cDNA的克隆、序列分析与真核表达载体构建被引量：1
- 2012年
- Mx蛋白是一类由I型干扰素(IFN)诱导表达的抗病毒蛋白。以PolyI∶C诱导的草鱼(Ctenopharyngodon indellus)肾细胞(CIK cells)为材料,抽提细胞总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出Mx基因cDNA全序列,连接至pMD20-T载体上,构建重组质粒pMD20-T-Mx,并测序进行序列分析。用限制性内切酶从克隆的重组质粒pMD20-T-Mx上切下Mx基因,插入到质粒pEGFP-C1中,构建真核表达载体pEGFP-C1-Mx。结果显示,该基因cDNA全序列为1 921 bp,阅读框共编码627个氨基酸,分子量约为71.1 ku,理论等电点pI为8.33,其编码的Mx蛋白具有脊椎动物Mx蛋白共有的结构特征:一个三联体GTP结合区域和一个发动蛋白家族的典型结构特征序列。生物信息学分析表明,草鱼Mx基因所编码的蛋白质以亲水区域为主,具有丰富的B细胞抗原位点,但无明显的核定位序列,空间结构包括N端的GTP酶结构域(GTPase domain)、中间的中央相互作用结构域(central interactive domain,CID)和C端的GTP酶效应结构域(GTPase effector domain,GED)。同源性分析显示,草鱼Mx蛋白氨基酸序列和其他物种的相似性为45.1%～99.7%。此外还成功构建了含草鱼Mx基因cDNA全序列的真核表达载体pEGFP-C1-Mx。研究亮点:首次通过干扰素诱生剂PolyI∶C诱导草鱼肾细胞的方法克隆得到了草鱼抗病毒基因Mx cDNA全序列,并且借助生物信息学软件对其编码的氨基酸进行了序列分析,还成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-Mx,为进一步研究草鱼Mx蛋白的生物学活性及其在抗鱼类病毒性疾病中的应用奠定基础。
- 刘莉刘鹏金佳丽吴海丽王改改江晨采克俊
- 关键词：草鱼MX基因克隆
