毛爽
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人抗氧化蛋白-1在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2014年
- 为得到较纯的具有活性的人抗氧化蛋白Peroxiredoxin1(Prx1),本文先用PCR的方法扩增了人Prx1的cDNA序列,然后将其连接到pET28表达载体上,从而构建了编码全长的人抗氧化蛋白-1基因的pET28-Prx1原核表达质粒。经双酶切及测序鉴定后将表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,并通过SDS-PAGE和western blot来鉴定表达产物。随后用Ni-NTA螯合亲和层析的方法纯化重组蛋白,并测定该酶的米氏常数,用质粒保护实验鉴定该蛋白其活性。最终表达载体经酶切和测序鉴定证实构建成功,表达产物在SDS-PAGE和western blot图的25 kD左右,与prx1真实的蛋白分子量相符,说明Prx1蛋白成功表达。Prx1纯化后产量达到7.59 mg/g菌体,纯度达到88.50%。纯化后的Prx1在37℃和pH 7.4的条件下催化H2O2反应的米氏常数Km为2.06×10-4 mol/L,质粒保护实验表明Prx1可以保护pUC18质粒免受氧化损伤。因此,Prx1在大肠杆菌中成功表达并得到较纯的活性蛋白。
- 毛爽陈少沛颜晟王海鹰宁正祥李杉王菊芳
- 关键词：蛋白印迹法
