岳翔
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人TANK结合激酶1的基因克隆、表达及生物活性鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的:克隆人TANK结合激酶1(TBK1)基因,构建其真核表达载体,检测该基因在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:应用RT-PCR方法,以HeLa细胞RNA为模板,扩增获得TBK1基因,定向克隆到pcDNA3-Flag载体中,以LipofectAMINE2000转染试剂转染pcDNA-Flag-TBK1至293细胞中进行瞬时表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,从人HeLa细胞总RNA中克隆到正确的TBK1基因全长编码序列,利用Western印迹检测其在293细胞中获得有效表达,利用萤光素酶报告基因实验检测TBK1可以诱导IFN-β转录激活。结论:真核表达的人TBK1具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。
- 魏从文管楷岳翔袁媛宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：真核表达
- TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的构建、表达及生物活性鉴定
- 2011年
- 目的:构建TANK结合激酶1(TBK1)相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,检测该基因相关突变体在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:根据文献报道的突变序列及QuickChange Site-Directed Mutagenesis实验设计手册,设计合成2条针对TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的引物,以实验室之前构建的TBK1野生型真核表达载体为模板,构建TBK1激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,分别命名为pcDNA3-Flag-TBK1(KD)、pcDNA3-Flag-TBK1(ΔULD)。以LipofactAMINE2000转染试剂转染至293细胞中进行瞬时表达,利用萤光素酶实验检测2种TBK1突变体诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体真核表达载体构建成功,Western印迹检测表明其在293细胞中获得有效表达;用萤光素酶报告基因实验检测,与野生型TBK1相比,其相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体诱导IFN-β转录激活的作用明显降低。结论:真核表达的TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。
- 魏从文管楷岳翔袁媛宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：真核表达转录活性
- 血管平滑肌细胞钙化过程中DNA损伤响应分子p21、p53和c-abl的变化
- 2011年
- 目的研究钙化发生过程中细胞DNA损伤响应分子表达水平的变化。方法半定量方法测定钙化细胞中p21、p53、c-abl的mRNA水平,通过免疫印迹法检测p53和chk1磷酸化水平。结果血管平滑肌细胞在10 mmolβ-磷酸甘油酯的诱导下,随着时间的延长,在时间点24,,6 d时,p21、p53、c-abl的mRNA水平上升,第8天后mRNA水平下降。在前6 d中,p53和chk1磷酸化呈逐步上升趋势。结论在钙化过程的前期,p21、p53、c-abl的mRNA水平上升,p53和chk1磷酸化水平也呈上升趋势,这表明钙化的发生和DNA损伤响应分子有关。
- 岳翔程孝中吴青黄蓓张艳红温朝阳钟辉
- 关键词：钙化DNA损伤P21P53C-ABL
