刘志敏
- 作品数:5 被引量:7H指数:1
- 供职机构:南华大学更多>>
- 发文基金:湖南省教育厅重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 原核表达载体pET30a/ATRX-C2193-2492的构建与诱导表达
- 2016年
- [目的]构建大鼠ATRX抗原端氨基酸序列的原核表达载体,为进一步制备ATRX多克隆抗体以及探讨ATRX蛋白在HPV16致宫颈癌中的作用奠定基础。[方法]以IF-GFP-ATRX质粒为模板,PCR扩增获得ATRX-C_(2193-2492)基因片段,并克隆至p ET30a(+)空载体上,转化E.coli BL21感受态细胞,构建原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),经PCR、双酶切以及测序鉴定。将构建好的质粒p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)转化,经IPTG诱导表达,利用镍离子亲和层析法纯化6His-ATRX-C_(2193-2492)蛋白。[结果]成功获得900 bp的ATRX-C_(2193-2492)基因片段并构建了原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),且该载体能在E.coli中诱导表达分子量约34 k Da蛋白产物。[结论]原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)能成功诱导表达分子量约34 k Da的ATRX-C_(2193-2492)蛋白,该蛋白纯化产物能为后续ATRX多克隆抗体的制备提供实验基础。
- 唐双阳刘志敏李冉辉申海艳赵兰华蔡恒玲万艳平
- 关键词:ATRX原核表达载体蛋白
- ATRX-C抗体的制备及在HPV16阳性宫颈癌组织中的初步应用
- [目的]研制和初步评价ATRX-C抗体;分析ATRX蛋白在THP-1细胞中的定位及ATRX在人乳头瘤病毒16型(HPV16)阳性宫颈癌组织中的表达和定位,为深入探讨ATRX蛋白在HPV16所致宫颈癌中的作用及机制奠定基础...
- 刘志敏
- 关键词:人乳头瘤病毒16型宫颈癌
- 抗ATRX-C_(2193-2492)多克隆抗体的制备和鉴定被引量:1
- 2017年
- 目的制备X连锁的α地中海贫血/精神发育迟滞综合症(ATRX)蛋白C端的多克隆抗体,分析ATRX蛋白在宫颈组织中的表达和定位。方法将纯化后的6His-ATRX-C_(2193-2492)蛋白免疫BALB/c小鼠,获得抗血清;饱和硫酸铵盐析沉淀法以及亲和层析法纯化抗血清,制备抗ATRX-C_(2193-2492)多克隆抗体。采用ELISA检测抗体效价;并用Western blot法鉴定其特异性;利用免疫组织化学技术检测宫颈癌组织细胞中ATRX的表达与定位。结果制备的ATRX-C_(2193-2492)抗血清效价可达1∶12 800,该抗体能特异性识别ATRX-C_(2193-2492)蛋白;并检测出在宫颈癌癌旁组织中ATRX具有较高表达并主要定位在细胞核,而在宫颈癌组织细胞中虽仍主要表达于细胞核,但表达量明显减少。结论成功制备了抗ATRX-C_(2193-2492)多克隆抗体,能够应用于宫颈组织中的ATRX蛋白表达的检测。
- 唐双阳刘志敏李冉辉陈艳赵兰华申海艳万艳平
- 关键词:多克隆抗体
- Caski细胞内Daxx与HPV16 E2蛋白的结合作用
- 2015年
- 目的研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E2蛋白在Caski细胞内与Daxx的相互作用,探讨它们在HPV16所致宫颈癌发生发展中的作用。方法利用间接免疫荧光染色技术观察HPV16 E2和Daxx在Caski细胞中的分布或共定位;通过免疫共沉淀试验和免疫印迹分析HPV16 E2与Daxx在Caski细胞内的相互作用。结果在Caski细胞内,Daxx和HPV16 E2主要分布于胞浆,少数分布于胞核,且两种信号在细胞浆内有一定的共存;抗E2抗体能沉淀Daxx,反之抗Daxx抗体同样能够沉淀HPV16 E2。结论 HPV16 E2与Daxx在Caski细胞存在直接的相互作用。
- 刘越唐双阳刘安元蔡恒玲安振刘志敏万艳平
- 关键词:人乳头瘤病毒16型CASKI细胞E2蛋白
- 人乳头瘤病毒感染与肿瘤的相关性研究进展被引量:6
- 2014年
- 人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPVs)是一种嗜人体皮肤和黏膜的DNA病毒,约80%有性行为的女性可能感染HPV。宫颈癌是最常见的恶性肿瘤之一,是女性肿瘤中仅次于乳腺癌的第二个常见的恶性肿瘤,高危型HPV感染是其主要致病因素,则宫颈癌是目前唯一病因明确的妇科恶性肿瘤。HPV感染亦与其他恶性肿瘤的发生、发展密切相关,可引起除宫颈癌外的其他泌尿生殖道肿瘤,以及消化道系统、呼吸道系统、眼科、皮肤等其他系统或器官肿瘤。对HPV感染所致肿瘤的相关研究进展进行了综述,为肿瘤病因和发生机理的研究提供了新的思路。
- 刘志敏唐双阳万艳平
- 关键词:人乳头瘤病毒肿瘤