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犬α-干扰素蛋白在不同表达载体中的生物学活性比较被引量：5: 2016年; 根据GenBank中公布的犬α-干扰素(CaIFN-α)基因核酸序列,去掉信号肽后设计并合成1对引物,引入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点。以提取的犬肝脏DNA为模板,利用PCR技术扩增CaIFN-α基因,并分别克隆至表达载体pBV220、pET-32a(His标签)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)原核表达系统。重组融合蛋白经SDS-PAGE及Western blotting鉴定。纯化目的蛋白,并采用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测其抗病毒活性。试验结果表明,与pBV220载体连接的目的基因表达的蛋白活性较低,而与pET-32a(His标签)连接的目的基因表达的蛋白活性较高,达2.56×106 U/mL。通过分析不同载体对IFN-α的表达情况,为生产高活性的IFN奠定基础。; 刘欢金红岩侯强史秋梅董瑞凯张通明侯绍华沈萍; 关键词：Α-干扰素原核表达生物学活性

猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒的制备与鉴定被引量：5: 2017年; 本研究从临床病料中扩增获得猪圆环病毒2型(PCV2)Cap基因,并进行序列分析和抗原性比对,然后利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞内将Cap基因进行表达,目的蛋白进行Western-blot、IFA、质谱鉴定以及透射电镜和免疫电镜检测。结果表明,扩增获得的PCV2 Cap基因属于PCV2d亚型,在抗原性方面与国内PCV2a、PCV2b代表性毒株及疫苗株存在4个部位的差异;在昆虫细胞内PCV2d Cap蛋白成功表达并具有良好的免疫原性;PCV2d Cap蛋白在昆虫细胞内完成自组装,形成与天然病毒结构相似的病毒样颗粒(VLP)。本研究首次在昆虫细胞内制备出PCV2d亚型病毒样颗粒,为PCV2d亚单位疫苗研制及诊断抗原开发奠定了基础。; 侯强侯绍华贾红姜一曈鑫婷李明陈青朱鸿飞; 关键词：核衣壳蛋白杆状病毒表达系统病毒样颗粒

抗犬细小病毒单链抗体的制备被引量：3: 2016年; 提取分泌犬细小病毒的杂交瘤细胞株3H9的总RNA,反转录获得c DNA链,并以此为模板扩增重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因,利用SOE PCR方法连接VH基因和VL基因,同时引入(Gly4Ser)3连接肽序列,扩增得到大小为765 bp的单链抗体(Sc Fv)基因。将Sc Fv基因连接至原核表达载体p ET-32a(+),构建成重组质粒p ET-32a-Sc Fv,转化至BL21(DE3)感受态细胞,并在37℃条件下进行IPTG诱导表达,得到融合蛋白。经SDS-PAGE分析大小约为46 ku,与预期结果相符。经Western-blotting鉴定,该蛋白能被抗His标签的单克隆抗体特异性识别。间接ELISA试验以及中和试验结果表明,Sc Fv能够与犬细小病毒结合,具有中和犬细小病毒的活性。本试验成功构建了抗犬细小病毒单链抗体,并获得了高效表达。; 刘欢金红岩侯强史秋梅董瑞凯张通明沈萍侯绍华; 关键词：犬细小病毒单链抗体原核表达活性鉴定

牛分枝杆菌Mb1230基因的表达纯化及其活性评价被引量：2: 2015年; 为了探究牛分枝杆菌Mb1230蛋白在牛结核病诊断中的应用价值,本试验利用PCR方法扩增出Mb1230基因,构建重组质粒pET-22b-Mb1230,经IPTG诱导表达后用亲和层析纯化重组蛋白,通过结核菌素皮内变态反应试验(TST试验)、IFN-γ释放试验(IGRA试验)和间接ELISA对重组蛋白的活性进行评价。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,重组蛋白大小与理论值相符,且能与鼠抗His的抗体反应有特异性条带;在TST试验、IGRA试验和间接ELISA中也表现出抗原活性。结果表明,重组Mb1230蛋白具有良好的B细胞活性和T细胞活性,在牛结核病诊断中具有应用潜力。; 李明贾红鑫婷郭晓宇袁维锋侯邵华侯强高新桃吴竞董瑞凯杨宏军刘来兴朱鸿飞; 关键词：牛分枝杆菌原核表达牛结核病诊断

抗猪圆环病毒2型病毒样颗粒单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1: 2018年; 为制备能够特异性识别猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP)的单克隆抗体(MAb),本研究利用杆状病毒表达系统分别制备了具有VLP结构的核衣壳蛋白(Cap)和去掉核定位信号肽的tCap蛋白,以前者为免疫原,后者为筛选抗原制备了一株杂交瘤细胞(1F6),通过western blot、间接免疫荧光和透射电镜对其生物学特性进行鉴定。结果显示,1F6 MAb与PCV2 VLP具有良好的特异性反应,同时能够特异性识别天然PCV2和线性结构的Cap蛋白。本研究制备的MAb为PCV2抗原表位的鉴定和PCV2 VLP定量方法的建立提供了工具。; 侯强侯绍华贾红姜一曈鑫婷李明陈青朱鸿飞; 关键词：猪圆环病毒2型单克隆抗体核衣壳蛋白病毒样颗粒

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侯强