赵宁
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 灰色关联分析在生猪代宰风险评估中的应用
- 2018年
- 目的应用灰色关联分析法对生猪代宰过程进行风险评估。方法以企业规模、车间面积、年屠宰量等为静态风险因素,布局设施、过程管理、人员资质、管理制度建立及运行等为动态风险因素,应用灰色系统理论中灰色关联分析方法对四川、重庆10个生猪代宰场进行风险评价,并与百分制评定法进行对比。结果采用2种方法对四川、重庆10个生猪代宰场风险评价,其中8号屠宰场百分制评定为79分,属于Ⅲ级(中等)范围;而采用灰色关联评判关联度为0.4241,关联序排名第5,关联度所在级别比百分制评定低一个等级,属于Ⅱ级(较低)范围。另对16个风险因素关联度大小排序结果显示:静态风险因素r_1(车间面积)和r_2(年屠宰量)为第1与第2名次;动态风险因素r_3~r_(16)中,r_7(进场)排在首位,与生猪屠宰需通过静养观察期,这一个关键因素相一致,其次是r_3(屠宰资质)和r_8(待宰)。对于r_(10)(肉品检验)、r_(14)(管理制度)和r11(无害化处理)等因素关联度次序亦符合屠宰场的生产实际。结论灰色关联评判法可提高风险防范能力和预警能力,有利于实现对不同风险等级的生猪屠宰企业进行分类管理,为监管部门基于风险分析的政策制定和监管创新提供支持。
- 赵宁陆昌华陆昌华谭业平郁达威肖颖
- 关键词：灰色系统灰色关联分析风险评估肉品安全
- 家兔支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1的原核表达及其间接ELISA方法的建立
- 2011年
- 目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)DNT蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌dnt基因序列(AB020025)针对其N-端设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pET-28a(+)载体中,以E.coli BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白DNT1作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数,建立检测支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1抗体的ELISA方法。结果成功克隆了dntN-端的基因序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白DNT1具有良好的抗原性。应用重组蛋白DNT1为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白DNT1抗原的包被浓度为6.25μg/mL,最适血清稀释度为1∶100。结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了一种比较实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。
- 赵宁恽时锋王芳范志宇胡波刘涛
- 关键词：支气管败血波氏杆菌原核表达间接ELISA
- 兔支气管败血波氏杆菌双夹心ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并与PCR检测方法比较。结果表明,兔抗Bb IgG的最佳稀释度为1∶6 400,浓度为2.5 mg/L;单抗的最佳稀释度为1∶800,浓度为5.0 mg/L。特异性试验和重复性试验结果表明,该方法特异性强、重复性好,与兔常见病菌大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌和产气荚膜梭菌均不发生反应,同时与PCR检测方法的符合率为100%。
- 熊富强王芳恽时锋林焱范志宇胡波赵宁
- 关键词：支气管败血波氏杆菌免疫血清单克隆抗体双夹心ELISA
- 兔支气管败血波氏杆菌DNT蛋白的分段表达及其免疫保护性研究被引量：1
- 2011年
- 皮肤坏死毒素(DNT)是支气管败血波氏杆菌(Bb)的主要毒力因子之一。为研究DNT结合位点和催化位点的免疫保护性,本研究分别将其核苷酸序列N-端的1 612 bp片段(DNT1)和C-端的973 bp片段(DNT3)克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,经IPTG诱导后在E.coli BL21(DE3)中获得表达。SDS-PAGE和western blot检测表明重组蛋白DNT1、DNT3均具有良好的反应原性。在主动免疫保护试验中,重组蛋白免疫组小鼠均能够产生较高的DNT抗体水平;当使用2 LD50的Bb强毒株BJL0504进行腹腔攻毒后,其存活率为100%,而阴性对照组则为40%;当使用1.07×108 cfu/mL Bb强毒株BJL0504进行滴鼻攻毒后第9 d时,重组蛋白免疫组小鼠已基本清除肺脏内的Bb菌,而阴性对照组小鼠肺脏内的Bb菌落数仍高达1.2×105 cfu/肺。本实验结果表明,DNT的结合位点和催化位点均具有良好的免疫保护性,有希望作为疫苗添加成分,为新型疫苗的研制提供实验依据。
- 赵宁王芳恽时锋范志宇胡波
- 关键词：支气管败血波氏杆菌原核表达免疫保护
