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甘草水提物中miRNA对人免疫细胞基因表达的影响被引量：21: 2017年; 微小RNA(micro RNA,miRNA)是一类在转录后水平调节基因表达的非编码小分子RNA,其调控基因表达、影响细胞活性的功能已为人们所重视。近年来miRNA的跨界调控成为新的研究方向,为人们更全面地认识和了解miRNA的功能提供了新的视角。植物miRNA由于通常经过了甲基化修饰,因此较为稳定,不易降解。前期研究表明,甘草干燥药材的水煎剂中存在着丰富的小分子RNA,这为了解甘草的作用机制提供了新的思路。在本研究中,利用从甘草水煎剂中提取的小分子RNA以及合成的miRNA模拟物(mimic)作用于分离自健康人的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),然后利用RT-PCR对其模式识别受体(PRR)基因以及部分转录因子、信号分子和细胞因子的基因表达变化进行了分析。结果表明甘草miRNA对人免疫细胞的基因表达具有明显的调节作用,能够显著抑制T细胞分化相关基因的表达,以及炎症和凋亡相关基因的表达。这为进一步更全面地了解甘草的作用机制以及中药新药的研制带来了新的思路。; 向静黄洁嫦徐畅何免徐鹏程张丹张文峰沈晗邵红伟; 关键词：小分子RNA 基因表达

基于CRISPR-Cas9定向编辑TRAC基因的研究: 2017年; 目的针对人源TCRαC基因(TRAC)进行CRISPR/Cas9-gRNA的设计,并验证设计的gRNA的有效性及其脱靶率。方法利用CRISPR网站(http://crispr.mit.edu/)提供的靶向编辑位点筛选工具,针对TCRαC区各设计出了3个编辑位点,并据此构建CRISPR-Cas9-TCR敲除质粒,将构建好的质粒转染293T细胞系,通过流式细胞术结合PCR产物的T-A克隆测序等方法验证各个gRNA序列的编辑效率。再根据所预测的潜在脱靶位点,设计相应的上下游引物进行PCR扩增后测序,检测其是否出现脱靶。结果在3组针对TCRαC区的gRNA中,site2-gRNA的编辑效率最高,并且无脱靶现象。结论针对人源TCRαC基因设计的site2-gRNA对TCRαC区具有很好的编辑效果,且无脱靶现象,为消除杂合TCR分子的产生和改善TCR修饰的T细胞(TCR-T)过继性免疫治疗奠定了基础。; 徐畅覃启富向静瞿创张丹徐鹏程张文峰沈晗邵红伟; 关键词：CRISPR

Na^+/K^+ATPase介导甘草诱导低钾血症的研究被引量：1: 2019年; 目的探讨高剂量甘草水提物导致小鼠低钾血症的分子机制。方法利用高剂量甘草水提物(7.5 g/kg)灌胃制备低钾血症小鼠模型,收集小鼠尿液和粪便,检测其K^+浓度;分析小鼠肠道组织的转录组数据,寻找与钾代谢相关基因的表达变化,并利用real-time PCR进行确认;针对显著改变的关键基因进行干预,确认其与甘草诱导低钾血症的关系。结果高剂量甘草水提物可造成小鼠低钾血症,转录组结果表明Na^+/K^+ATPase的表达水平发生显著变化,real-time PCR结果也确证了这一点,肠道病理切片显示肠道通透性发生改变;低钾血症小鼠的尿钾降低,而粪便中K^+浓度增多,表明甘草水提物诱导的低钾血症可能主要由肠道失钾造成;给予Na^+/K^+ATPase抑制剂处理后,尿液中K^+浓度快速升高,粪便中的K^+浓度降低;继续予以高剂量甘草水提物处理,在Na^+/K^+ATPase抑制剂药效消除后小鼠尿液和粪便中K^+浓度又恢复至造模状态。结论高剂量甘草水提物造成的低钾血症主要是由胃肠道失钾造成的,而这种低钾血症可以通过Na^+/K^+ATPase抑制剂特异性地进行逆转。; 张亚倩徐鹏程张琴徐榕张文峰沈晗陶嫦立邵红伟; 关键词：甘草低钾血症

甘草及其miRNA对小鼠肠道菌群和免疫的影响: 背景及目的:前期实验研究发现,miRNA156在甘草水提物miRNA中丰度较高,并经由细胞形态学、细胞增殖情况和免疫相关基因表达探索了甘草miRNA对人免疫细胞的影响。本研究从小鼠肠道菌群、淋巴细胞免疫基因表达、肠道组织...; 徐鹏程; 关键词：甘草 MIRNA 肠道菌群转录组测序免疫

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徐鹏程