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金黄色葡萄球菌traP突变菌株的构建和功能研究: 2010年; 目的通过构建traP突变菌株研究RNAⅢ激活蛋白靶蛋白(TRAP)蛋白在金黄色葡萄球菌(SAU)中的功能。方法利用同源重组的方法在金黄色葡萄球菌(SAU)8325-4中构建traP的缺失突变菌株,对其表型和几种压力条件下的生长和生存状况进行检测,揭示其在金黄色葡萄球菌生命活动中的作用。结果在金黄色葡萄球菌8325-4中成功构建了traP的缺失突变菌株,突变株生长缓慢,其他表型如疏水性、表面电荷和生物膜发生了明显的变化;在重金属、过氧化氢,以及全血杀伤等压力条件下的生长和生存状况也发生了明显改变。结论TRAP蛋白在金黄色葡萄球菌侵袭机体的过程中发挥着重要的功能。; 吴娜刘玉董洁高亚萍张鑫邵宁生杨光; 关键词：TRAP TRAP 突变

金黄色葡萄球菌RNaseH Ⅰ、RNaseH Ⅱ和RNaseH Ⅲ突变菌株的构建及功能研究: 2010年; 目的:在金黄色葡萄球菌中分别构建RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的突变菌株,并研究它们在金黄色葡萄球菌中的生物学功能。方法:利用同源重组的方法在金黄色葡萄球菌中分别构建RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的插入突变菌株,检测突变株生长速度、溶血活性及外分泌蛋白表达水平与野生型的差异,进一步通过流式细胞术检测突变株外分泌蛋白细胞毒性的改变,同时在体外检测突变株在全血中的存活能力。结果:构建了金黄色葡萄球菌RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的插入突变菌株;表型检测结果显示,与野生型菌株相比,3种突变株的生长速度减慢,溶血素和外分泌蛋白明显减少;流式细胞术检测结果显示3种突变株毒性比野生型菌株减弱;全血杀伤实验结果显示3种突变株在全血中的存活率低于野生型菌株。结论:RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ在金黄色葡萄球菌生长繁殖、毒素产生和侵袭机体的过程中有重要作用,它们可能与金黄色葡萄球菌的致病性相关。; 吴娜刘玉董洁高亚萍张鑫牟春花邵宁生杨光; 关键词：金黄色葡萄球菌突变

金黄色葡萄球菌糖肽水解酶LytM及其C端的表达、纯化与功能研究: 2010年; 目的利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌(SAU)糖肽水解酶LytM及其C端185～316 aa蛋白(LytM185～316),检测其生物学活性,并制备多克隆抗体,为检测LytM活性体的天然形式和产生机制以及研究LytM蛋白在SAU感染中的生物学意义奠定基础。方法以SAU 8325-4基因组为模板,PCR扩增lytM及其C端基因,并将其克隆入pET-28a构建重组表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导阳性克隆表达目的蛋白,通过亲和纯化获得目的蛋白LytM及LytM185～316,并制备LytM的多克隆抗体;用薄层层析法测定LytM以及LytM185～316的生物活性,并检测重组蛋白对SAU 8325-4菌体的裂解作用。结果成功构建了表达载体pET-28a-LytM和pET-28a-LytM185～316,获得了纯度较高的重组蛋白LytM及LytM185～316,经测定LytM不能够水解底物而LytM185～316具有较强的糖肽水解酶活性。制备了高效价的抗LytM的多克隆抗体,并证实其可以与LytM及LytM185～316特异性结合。结论只含有C端185～316 aa的重组蛋白能够水解底物,而全长的LytM不具有糖肽水解酶活性。; 牟春花刘玉董洁吴娜高亚萍邵宁生杨光; 关键词：多克隆抗体

金黄色葡萄球菌中的RNaseⅢ蛋白在金葡菌感染防治中的应用: 本发明属于生物技术领域，涉及金葡菌RNaseIII蛋白的应用。RNaeIII蛋白作为金葡菌中一种核糖核酸酶，参与金葡菌外分泌蛋白的合成和分泌，从而影响金葡菌致病力。因此，RNaseIII蛋白在金葡菌感染的防治领域有良好的...; 杨光刘玉吴娜董洁高亚萍邵宁生; 文献传递

金黄色葡萄球菌Efb蛋白的表达、纯化及功能抗体的制备被引量：3: 2009年; 目的:利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌外分泌蛋白Efb(extracellular fibrinogen-binding protein,细胞外纤维蛋白原结合蛋白),检测其生物学活性,并制备其功能性抗体,以探讨Efb蛋白在金葡菌感染中的生物学意义。方法:以金黄色葡萄球菌NCTC-8325菌株基因组为模板,PCR扩增efb基因,构建重组表达载体pET28a-Efb,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,通过Ni柱亲和纯化获得Efb;通过补体激活试验及竞争ELISA的方法检测Efb蛋白的生物学活性,免疫动物制备抗体。结果:获得了纯度较高的重组Efb蛋白,重组蛋白能够有效抑制CH50以及AH50,并且制备了Efb的功能性多克隆抗体。结论:Efb蛋白能够抑制补体激活的经典途径及替代途径,其特异性抗体能够阻断对于补体激活经典途径的抑制作用。; 张鑫高亚萍董洁刘玉吴娜邵宁生杨光; 关键词：葡萄球菌金黄色 EFB 抗体

金黄色葡萄球菌中的Hfq蛋白在金葡菌感染防治中的应用: 本发明属于生物技术领域，涉及金葡菌Hfq蛋白的应用。Hfq蛋白作为金葡菌中一种tmRNA-ssrA的伴侣分子，参与调控金葡菌表面色素的合成，从而影响金葡菌抗宿主免疫的能力。因此，Hfq蛋白在金葡菌感染的防治领域有良好的应...; 杨光刘玉吴娜董洁高亚萍邵宁生; 文献传递

金黄色葡萄球菌Hfq蛋白体外聚体生成和生物学功能的研究被引量：1: 2009年; 目的:研究金黄色葡萄球菌中Hfq蛋白的聚体形式以及聚体和单体的不同生物学功能。方法:利用pET28-(a)载体克隆表达金葡菌来源的Hfq蛋白,通过天然凝胶电泳和SDS-PAGE检测不同条件下Hfq蛋白的存在形式。通过点突变的方法获得56和63位突变的Hfq蛋白,利用凝胶阻滞试验检测单体和聚体的RNA结合活性。结果:Hfq蛋白以单体、二聚体、四聚体以及六聚体的形式存在,各种聚体比例不同,长时间的高温、强酸和强碱会影响聚体的稳定性。在常规SDS-PAGE条件下,重组蛋白仅以四聚体形式存在。突变体蛋白不能够形成聚体且只有形成聚体的Hfq蛋白才能特异结合RNA。结论:Hfq蛋白形成聚体的过程是二聚体四聚体六聚体,且不同聚体形成的机制不同。56位和63位酪氨酸是Hfq蛋白聚体形成的关键氨基酸。聚体结构对Hfq蛋白发挥RNA伴侣分子生物学功能至关重要。; 刘玉吴娜高亚萍董洁杨光邵宁生; 关键词：葡萄球菌金黄色

金黄色葡萄球菌中的ssrA在金葡菌感染防治中的应用: 本发明属于生物技术领域，涉及金葡菌中的一种tmRNA-ssrA的应用。通过对ssrA生物学功能的研究发现，它能够作为反义RNA，作用于金葡菌色素合成相关的关键基因crt基因和sigB基因的SD序列，从而影响金葡菌抗宿主免...; 杨光刘玉吴娜董洁高亚萍邵宁生; 文献传递

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吴娜