刘贝
- 作品数：5 被引量：31H指数：3
- 供职机构：南京中医药大学第一临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SD大鼠腺垂体细胞体外分离方法的比较被引量：2
- 2017年
- 目的体外分离腺垂体制备主要包括酶消化及机械法等方法,但何种方法效果更好尚无相关报道。现比较大鼠腺垂体细胞体外分散制备的几种主流方法并对其进行促性腺激素分泌细胞鉴定,明确何种制备方法更为便捷高效。方法将48只成年雌性SD大鼠按随机数字表法分为胰酶组(0.25%胰酶EDTA液消化)、Ⅳ型胶原蛋白酶组(Ⅳ型胶原蛋白酶消化)、机械分离组(200目细胞筛研磨)及胰酶+机械分离组(0.25%胰酶EDTA液消化+200目细胞筛研磨),每组12只。评价各种方法制备细胞的效果。培养各组原代细胞,动态观察各组细胞在体外生长的情况,并利用免疫细胞化学染色技术进行鉴定。结果与机械分离组细胞活率[(90.25±0.96)%]比较,胰酶组、胰酶+机械分离组[(94.11±1.71)%、(94.92±1.92)%]均升高;与Ⅳ型胶原蛋白酶细胞活率[(93.32±1.77)%]比较,胰酶组、胰酶+机械分离组亦明显升高(P<0.05)。形态学观察:各种方法制备的腺垂体细胞均呈圆形,折光性强,边缘完整清楚。培养16~24 h候开始部分贴壁,至48~72 h绝大部分细胞贴壁,早期腺细胞仍为圆形,体积较前减小,可见少量大体积的细胞散落分布其间。培养7 d后,细胞变为多角形或梭形,并连接成片,至10 d左右,纤维化逐渐明显;免疫细胞化学染色表明FSH阳性细胞体积较大,数量少,散在分布;其阳性产物位于细胞质内,呈蓝色;酶联免疫吸附试验测定细胞上清液证实离体细胞仍有激素分泌功能。结论对比单一制备细胞方法,胰酶消化+机械分离法具有一定优势;体外培养的垂体前叶细胞生长良好,分泌功能存在,可胜任相关科学实验。
- 蒋小飞周惠芳周伯如刘贝袁艺祯单进军徐建亚谢彤
- 关键词：SD大鼠体外培养免疫化学染色
- 补肾助孕方对LPD模型大鼠垂体GnRH受体信号转导系统的影响被引量：11
- 2017年
- 目的通过观察补肾助孕方对大鼠垂体促性腺激素及促性腺激素释放激素(GnRH)受体信号系统的影响,探究其作用机制,寻找中医心-肾-子宫轴理论的现代科学依据。方法采用米非司酮对SD雌鼠进行造模,并进行药物干预。采用ELISA法检测大鼠血清样本促黄体生成激素(LH)和促卵泡成熟激素(FSH)水平,qPCR法检测各组大鼠垂体FSHβ、LHβ基因转录水平。对大鼠垂体GnRH受体信号转导系统关键分子以及下游重要转录因子分别采用qPCR与Western blot方法检测其基因转录与蛋白表达水平。结果补肾助孕方显著提高了由米非司酮诱导的血清低FSH水平与垂体GnRH受体低表达(P<0.05),补肾助孕方组高、低剂量组中PKC、p38MAPK、JNK、ERK、PKA等关键信号转导分子以及c-Jun、Elk-1、Egr-1、CREB等转录因子的mRNA及蛋白表达均显著高于模型组(P<0.05),但CAM及其下游的Nur77在各组间均无显著差异。结论补肾助孕方能够通过调节垂体GnRH受体信号转导系统调节垂体促性腺激素的分泌水平,证明该方具有调节生殖轴整体功能的作用,阐释了中医心-肾-子宫轴理论与现代医学下丘脑-垂体-卵巢轴在内容上的一致性。
- 周伯如周惠芳刘贝朱宏坤戴佳轩徐建亚谢彤
- 关键词：黄体功能不全GNRH受体
- 补肾助孕方对黄体功能不全模型大鼠的治疗作用及机制被引量：1
- 2022年
- 目的 探讨补肾助孕方对黄体功能不全(luteal phase defect,LPD)模型大鼠的治疗作用及机制。方法 将30只SD雌性大鼠随机分为空白、模型、中药低剂量、中药高剂量、阳性对照组。观察大鼠进入动情期后,上午除空白组外各组大鼠灌服米非司酮,空白组灌服生理盐水,下午各用药组灌服相应的药物,空白、模型组灌服生理盐水,连续3个动情周期,完成LPD的造模及给药后处死大鼠。检测大鼠血清雌二醇(E_(2))、孕酮(P)水平,KNDy神经元上3种神经肽及其受体(Kisspeptin/GPR54、NKB/NK3R、DYN/KOR)的mRNA与蛋白水平。结果 与空白组比较,模型组E_(2)、P均有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,中药低、高剂量组E_(2)、P均有上升趋势,其中中药低、高剂量组E_(2)差异均有统计学(P<0.05)。与空白组比较,模型组KNDy神经元相关肽的mRNA水平均有下降趋势,其中GPR54、NK3R、DYN差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,中药低剂量、高剂量组相关基因均有上升趋势,其中中药低、高剂量组GPR54、NK3R、DYN差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,模型组KNDy神经元相关肽的蛋白表达均有下降趋势,其中NKB、DYN、KOR差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,中药低剂量、高剂量组KNDy神经元相关蛋白均有上升趋势,其中中药高剂量组GPR54、NKB、NK3R、DYN、KOR差异有统计学意义(P<0.05)。结论 补肾助孕方可通过上调大鼠KNDy神经元相关神经肽的表达,改善卵巢黄体功能,对LPD起到治疗作用。
- 刘玉楠刘贝袁艺祯张双周惠芳
- 关键词：黄体功能不全
- 补肾助孕方对大鼠垂体细胞促性腺激素的调节被引量：7
- 2018年
- 目的目前黄体功能不全的机制尚不明确,文中观察补肾助孕方含药血清对大鼠垂体细胞促性腺激素(FSH)和促黄体生成激素(LH)分泌功能的影响,探讨补肾助孕方干预垂体分泌促性腺激素的作用机制。方法用补肾助孕方水煎剂给雌性SD大鼠灌胃,制备补肾助孕方含药血清。采用CCK-8法检测注射用醋酸西曲瑞克、含药血清和垂体促性腺激素释放激素(GnRH)对细胞活性的影响。在最大无毒浓度的条件下,采用注射用醋酸西曲瑞克阻滞垂体细胞GnRH受体,用RPC细胞建立受体拮抗模型(模型组),另建立空白组(正常细胞)、西曲瑞克组(仅单纯注射醋酸西曲瑞克作用6 h)、补肾助孕方组(仅加含补肾助孕药血清作用24 h)。使用20 nmol/L GnRH刺激细胞6 h,检测各组细胞上清液中FSH和LH含量,以及FSHβ与LHβ、GnRHR的mRNA表达。结果与空白组比较,西曲瑞克组细胞上清FSH降低[(3.91±0.36)m IU/m L vs(2.26±0.22)m IU/m L,P<0.05]、LH降低[(8.94±0.57)m IU/m L vs(3.35±0.59)m IU/m L,P<0.05],补肾助孕方组细胞上清LH显著升高[(8.94±0.57)m IU/m L vs(10.79±0.60)m IU/m L,P<0.05];与西曲瑞克组相比,补肾助孕方组与模型组细胞上清FSH、LH水平均明显升高(P<0.05)。与空白组比较,西曲瑞克组FSH mRNA显著降低[(0.95±0.23)vs(0.58±0.12),P<0.01]、LH mRNA显著降低[(0.98±0.14)vs(0.27±0.21),P<0.01],GnRHR mRNA表达升高[(0.97±0.13)vs(1.77±0.26),P<0.01];补肾助孕方组FSH mRNA、LH mRNA升高(P<0.05)。与西曲瑞克组比较,补肾助孕方组、模型组FSHβmRNA、LHβmRNA表达均升高(P<0.05),而GnRHR mRNA表达降低(P<0.01)。结论补肾助孕方能显著提高大鼠垂体细胞GnRH受体拮抗模型的FSH、LH分泌水平,降低异常升高的GnRH受体的mRNA及蛋白水平。补肾助孕方可改善GnRH受体表达功能。
- 刘贝周惠芳周伯如蒋小飞徐建亚谢彤单进军
- 关键词：垂体细胞含药血清
- 中药对下丘脑作用的研究进展被引量：12
- 2017年
- 下丘脑是人体重要的内分泌启动器官,其对女性下丘脑-垂体-卵巢(HPOA)生殖轴以及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)等具有关键的调控作用。近年来,研究发现多种补肾、疏肝中药可对下丘脑的促性腺激素释放激素(GnRH)分泌及下游器官功能、神经递质以及相关关键蛋白表达产生影响。本文从以上三方面综述了中药对下丘脑的作用,为以后的研究提供了思路。
- 刘贝周惠芳周伯如蒋小飞单进军徐建亚谢彤
- 关键词：中药下丘脑HPA轴生殖内分泌
