佟青玥
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 几种成年小鼠胸腺上皮细胞分离和富集方法效果的比较
- 2016年
- 目的:通过比较几种成年小鼠胸腺上皮细胞(TECs)分离和富集方法的效果,寻找一种具有准确体内代表性的高效TECs富集方法。方法:27只6~8周龄BABL/c小鼠分为9组,每组3只。1分离实验分为5个分离组,包括1.0g·L^(-1) collagenaseⅤ组和0.5、0.7、1.0及2.0U·mL^(-1) LiberaseTM组,按照相应的酶工作浓度对胸腺组织进行消化处理;2富集实验分为4个富集组,包括对照组和免疫磁珠(MACS)、Percoll及Ficoll富集组,各组用1.0U·mL^(-1) LiberaseTM消化胸腺组织后,将所得的单细胞悬液分别用MACS、Percoll和Ficoll法进行细胞富集(对照组除外)。分离组通过流式细胞术检测细胞活力及胸腺基质细胞(TSCs)的产量;富集组通过流式细胞术检测细胞活力、TSCs比例和TSCs中TECs重要标志上皮细胞黏附分子(EpCAM)的表达丰度,检测Percoll富集组和对照组TECs的2个亚群——皮质TECs(cTECs)和髓质TECs(mTECs)比例。结果:1.0U·mL^(-1) Liberase TM组中TSCs的产量明显高于0.5和0.7U·mL^(-1) LiberaseTM组(P<0.01),且其细胞活力及消化时间均优于1.0g·L^(-1)collagenaseⅤ组(P<0.01)。3个富集组的细胞活力均较高,但组间比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,3个富集组TECs比例明显增加(P<0.05或P<0.01);在3个富集组中,Percoll富集组富集的TECs比例高于其他2个富集组(P<0.01);与对照组比较,Percoll富集组cTECs和mTECs的百分比及cTEC/mTEC比值无明显变化(P>0.05)。结论:Liberase TM较collagenaseⅤ更适用于消化成年小鼠胸腺,其最适消化浓度为1.0U·mL^(-1)。本研究采用的3种富集方法均可以提高TECs比例,对细胞的破坏均较小;Percoll富集法最有效,在富集后不影响TECs亚群细胞比例,便于后续实验操作。
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- 关键词：胸腺上皮细胞流式细胞术
