- 甲羟戊酸激酶基因真核及shRNA表达载体构建及其对BxPC-3细胞周期蛋白表达的影响被引量：5
- 2016年
- 目的 构建甲羟戊酸激酶（MVK）基因真核及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞中,观察其对细胞周期蛋白的影响。方法 从BxPC-3细胞中提取总RNA,逆转录PCR（RT-PCR）法获得目的基因MVK以及通过化学合成MVK（751~779）和MVK（1089~1117）位点寡核苷酸片段,构建真核表达及shRNA表达载体并转染至BxPC-3细胞,筛选稳定表达细胞系。Westernblot法分析转染后对BxPC-3细胞周期蛋白的影响。结果 成功获得MVK基因真核表达（pcD-NA3.1-mvk）及两个针对MVK shRNA表达载体（piLenti-RNAi-shRNA1/2）。通过抗生素筛选及Westernblot分析获得了稳定的MVK过表达及低表达细胞株。Westernblot分析显示：过表达MVK的细胞株及MVK knockdown的细胞株中细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinE表达量与正常及对照细胞相比均显著降低。结论 MVK过表达及低表达均抑制Bx-PC-3细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E的表达。
- 金锐王芳栾康罗欣张胜权
- 关键词：基因重组细胞周期蛋白BXPC-3SHRNA
- TLR7激活对Hela细胞增殖的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨Toll样受体7(TLR7)在Hela细胞中的表达以及激活TLR7后对Hela细胞增殖和MAPKs-ERK1/2及PI3K-AKT两条信号通路的ERK和AKT磷酸化水平的影响。方法采用Real-time PCR分析TLR7在Hela细胞中的表达;使用不同浓度的TLR7激动剂Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞,采用MTS比色法分析其对Hela细胞增殖的影响;Western blot分析Gardiquimod对Hela细胞ERK1/2及AKT蛋白磷酸化水平的影响。结果 TLR7在Hela细胞中呈组成性弱表达;TLR7激动剂Gardiquimod可促进Hela细胞的增殖,且呈时间及剂量依赖性;Gardiquimod激活TLR7后可以显著增加Hela细胞中ERK1/2和AKT的蛋白磷酸化水平。结论 TLR7激动剂Gardiquimod能够活化MAPK-ERK1/2和PI3K-AKT信号通路的ERK1/2和AKT蛋白磷酸化水平,并促进Hela细胞的体外增殖。
- 李磊程丰伟王芳金锐罗欣张胜权
- 关键词：TOLL样受体7HELA细胞细胞增殖信号通路
- TLR7激动剂Gardiquimod上调BxPC-3细胞中IL-15 mRNA表达
- 2015年
- 目的研究TLR7在胰腺癌Bx PC-3细胞中表达,并探讨TLR7激动剂激活TLR7后细胞因子白介素15(IL-15)的表达。方法通过Western blot和Real-time PCR分析TLR7在细胞内的表达水平;Bx PC-3细胞经过不同时间点Gardiquimod(3μg/ml)的处理后,Real-time PCR分析TLR7激活后IL-15 mRNA水平表达变化;Western blot分析Gardiquimod刺激细胞后,磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路的变化。结果 Western blot和Real-time PCR结果显示:与外周血单核细胞(PBMC)相比,TLR7在Bx PC-3中弱表达;Real-time PCR分析显示:Gardiquimod处理细胞后能刺激细胞中IL-15的表达;TLR7激动剂能够激活PI3K-AKT信号通路。结论 Gardiquimod激活TLR7后能够上调IL-15的表达,并且其激活与PI3KAKT信号途径相关。
- 王芳金锐李磊程丰伟罗欣张胜权
- 关键词：IL-15PI3K-AKTBXPC-3
- PDX1真核表达载体的构建及其对PANC-1细胞PI3K/AKT信号途径的影响
- 2017年
- 目的构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX1)基因真核表达载体并转染至PANC-1细胞,观察其对PI3K/AKT信号通路的影响。方法从Hela细胞中提取总RNA,逆转后PCR扩增PDX1编码区片段,然后将PDX1的CDS插入PCMV6-Entry质粒构建PCMV6-Entry-PDX1表达重组体。重组体转染至PANC-1细胞中通过G418筛选出稳定表达细胞株。Western blot分析PDX1蛋白水平表达及p-AKT水平变化。结果 PDX1基因成功在PANC-1中表达。利用Western blot检测验证获得了稳定的PDX1过表达细胞株。Western blot结果显示:过表达PDX1的细胞株AKT表达含量与正常细胞及对照细胞没有区别而p-AKT水平降低。结论PDX1基因过表达能够降低PANC-1细胞的p-AKT水平。
- 栾康金锐刘莉罗欣张胜权
- 关键词：基因重组PI3K/AKT信号通路PANC-1
- 甲羟戊酸代谢途径紊乱对原代角质形成细胞增殖、分化及凋亡的影响
- 目的探讨甲羟戊酸代谢途径紊乱对原代角质形成细胞(KCs)增殖、分化及凋亡的影响,以及参与调控的可能的分子机制,为更清楚的了解播散型浅表性光化性汗孔角化症(DSAP)的病理及分子机制提供依据。方法(1)培养人原代皮肤角质形...
- 金锐
- 关键词：甲羟戊酸途径增殖分化凋亡
- 文献传递
- Gardiquimod对HepG2细胞中VEGF和TIMP1表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的研究Toll样受体7(TLR7)的配体Gardiquimod对HepG2细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA表达的影响,并分析其激活的信号通路。方法 HepG2细胞经不同时间的Gardiquimod(2μg/ml)处理后,提取细胞总RNA和总蛋白,RT-PCR分析VEGF和TIMP1转录水平的变化;Western blot分析丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)信号通路,并通过MAPKs-ERK1/2特异性阻断剂PD98059阻断相应的信号途径,进而分析两者的相关性。结果 HepG2细胞中表达TLR7,但较外周血单个核细胞(PBMC)较少。Gardiquimod刺激HepG2 10 min后下调细胞中VEGF mRNA的表达,而刺激细胞30 min后TIMP1 mRNA的表达有明显的上调;Western blot结果显示,细胞中的ERK1/2的磷酸化水平明显降低;并且ERK1/2的特异性抑制剂(PD98059)能有效抑制HepG2细胞中ERK1/2磷酸化作用。结论 TLR7激活能够下调HepG2细胞中VEGF的表达,并与ERK1/2信号通路相关;同时TLR7激活上调TIMP1的表达,但与ERK1/2信号通路无相关性。
- 程丰伟李磊王芳金锐罗欣张胜权
- 关键词：VEGFTIMP1HEPG2
