蒋一凡
- 作品数：16 被引量：106H指数：4
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：湖南省教育厅重点项目湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单链抗体的制备及鉴定
- 2024年
- 为了获得特异性针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白单链抗体(scFv),本研究以CD2v阳性单克隆抗体杂交瘤细胞为模板,通过PCR扩增得到抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,利用Overlap-PCR在VH和VL基因间引入短肽(Gly4Ser)2连接形成scFv。将其插入原核表达载体p ET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG于25℃条件下诱导表达,通过ELISA对复性scFv蛋白进行反应活性评价。结果显示,通过CD2v蛋白的阻断ELISA筛选出分泌阻断效果良好的单抗杂交瘤细胞株4B8,并成功扩增获得单克隆抗体4B8的重链可变区(VH,399 bp)、轻链可变区(VL,369 bp)及由GS Linker连接而成的4B8-scFv基因(744 bp);SDS-PAGE结果显示,4B8-scFv在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,通过尿素变性及透析复性,得到纯度较高的4B8-scFv(相对分子质量约为34 ku);间接ELISA结果表明,4B8-scFv与CD2v蛋白具有良好的反应活性。
- 杜晨暄邹亚文张颜王智勇李丹彤喻蓓蕾蒋一凡蒋一凡何庆杨毅王乃东
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体单链抗体
- 猪Lck蛋白在猪圆环病毒2型体外复制过程中的作用
- 2024年
- 为了鉴定猪圆环病毒2型(PCV2)侵染细胞建立感染的重要宿主因子,本文分析在PK-15细胞中猪淋巴细胞特异性酪氨酸激酶Lck表达及活性对PCV2感染复制的影响,确定Lck是调控PCV2感染复制的新靶点。首先,本研究基于猪Lck结构特性和序列保守性分析,选取Lck SH3结构域为免疫原基因序列,利用原核表达目的蛋白制备小鼠抗猪Lck的多克隆抗体。然后,通过Western blot检测PCV2感染PK-15和3D4/21细胞后对Lck表达及活性的影响。最后,在PK-15细胞中利用瞬时转染过表达或Lck特异性抑制剂(A770041),通过Western blot和荧光定量PCR(RT-qPCR)检测猪Lck表达和磷酸化对PCV2复制的影响。结果显示,成功制备了鼠源性抗猪Lck的多克隆抗体。在PCV2感染PK-15和3D4/21细胞早期阶段,Lck表达水平未见明显变化,但Lck磷酸化水平显著上调。过表达Lck可显著上调PCV2 Cap蛋白表达及病毒拷贝数,而采用A770041抑制Lck磷酸化水平后,可显著下调PCV2 Cap蛋白表达、病毒拷贝数和病毒滴度,这些结果表明Lck正调控PCV2的感染复制,为发现PCV2感染的新分子机制奠定重要基础。
- 刘伟姣何庆蒋一凡曹思雨张时瑞吕佳璐龙娉杨凌宸周川王乃东
- 关键词：PCV2CAPSIDLCK病毒复制
- PCV2 Loop EF区的突变体、引物及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种PCV2Loop EF区的突变体、引物及其制备方法和应用，PCV2Loop EF区的突变体，其Loop EF区第133位丙氨酸形成供外源表位替换和/或插入的可突变位点以便在体外组装成完整的VLPs。电镜结...
- 王乃东张素姣王东亮杨毅湛洋余婉婷蒋一凡王爱兵
- 文献传递
- 野鼠中猪圆环病毒2型毒株的分离鉴定及其基因变异情况分析被引量：1
- 2024年
- 湖南省某规模化猪场妊娠母猪发生由PCV2感染引起的繁殖障碍,为了解猪场周围野鼠PCV2感染及其基因变异情况,本研究采用PCR法检测从该场采集的猪血液及该场周边的野鼠组织样品中是否存在PCV2核酸;扩增PCV2阳性样品全基因组并测序,分析鼠源和猪源PCV2全基因组的同源性与遗传进化关系,对野鼠源PCV2(HNRCV株)进行分离与鉴定。结果表明,该场母猪和周边野鼠存在PCV2感染,且猪源和野鼠源PCV2全基因组序列(1767 bp)的同源性为100%;同源性与遗传进化分析结果表明,湖南HNRCV分离株与美国毒株22625-33的同源性最高(99.89%),同属于PCV2d,且Cap基因的同源性为99.72%;在野鼠组织中成功分离出HNRCV株,并且该分离株可在PK-15细胞中增殖。本研究结果提示,野鼠在猪场中PCV2的流行与传播发挥着重要作用,为PCV2的防控提供科学依据。
- 孟晨光喻蓓蕾王开心彭小烨谭磊谭磊彭璇蒋一凡
- 关键词：猪圆环病毒2型野鼠
- RGD修饰对PCV2 VLPs抗体水平的影响及其与细胞蛋白互作机制研究
- 猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2,PCV2）可引起猪圆环病毒相关疾病（Porcine Circovirus Associated Diseases,PCVAD）,在世界范围内普遍流行。目...
- 蒋一凡
- 关键词：猪圆环病毒2型VLPSRGD
- 猪圆环病毒3型检测及其Cap结构序列和抗原性预测分析被引量：93
- 2017年
- 近期报道在美国多个州的养猪场发现了一种新型的猪圆环病毒3型毒株(porcine circovirus 3,PCV3)。为了确定PCV3是否已经在我国南方部分省份的猪场中广泛存在,并对目前PCV2疫苗是否对PCV3感染具有交叉保护作用作出科学预测,笔者对我国南方几个省份疑似猪皮炎肾病综合征的病猪组织样品进行PCV3巢式PCR检测及其核衣壳蛋白质(capsid protein,Cap)结构的PyMol和抗原表位服务器在线模拟分析。结果首次在这些病料中检测到PCV3的存在,部分病料表现为PCV2和PCV3共感染的特性。对其Cap结构及抗原性分析发现,PCV2和PCV3表现出很大的差异。因此,推测PCV2和PCV3不具有交叉免疫保护的特性,新的疫苗研究和开发,对于将来控制PCV3流行是必要的。
- 湛洋王东亮王乃东蒋一凡黄坤崔尚金姜平杨毅
- 关键词：皮炎肾病综合征巢式PCR
- PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用
- 本发明公开了一种PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用。本发明的PHB2基因或蛋白的抑制剂在制备抗猪圆环病毒2型药物中的应用，通过间接免疫荧光试验检测PCV2在PK‑15细胞中的增殖变化，检测PCV...
- 王乃东蒋一凡邹亚文余婉婷张佳鑫何庆
- Src和Abl酪氨酸蛋白激酶家族参与病原微生物感染的研究进展被引量：6
- 2019年
- Src和Abl家族激酶属于非受体型酪氨酸激酶(Nonreceptor tyrosine kinase,NRTK)家族重要成员,广泛存在于各种细胞中,参与细胞内信号传递并调节细胞生理过程,它们在维持细胞、组织和器官稳态功能中发挥着至关重要的作用。研究表明,Src和Abl家族激酶通过多种机制参与病原微生物的感染(如与病原微生物的脯氨酸基序-PXXP互作)。因此,从Src和Abl家族激酶角度出发探究病原微生物感染机制逐渐成为一个热点。本文就Src和Abl家族激酶的结构特点以及参与病原微生物感染的研究报道进行综述,以期为病原微生物感染的致病机制、防控和药物研发提供参考。
- 张佳鑫蒋一凡蒋一凡秦艺文湛洋王乃东
- 关键词：SRCABL微生物感染
- PCV2 Loop EF区的突变体、引物及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种PCV2Loop EF区的突变体、引物及其制备方法和应用，PCV2Loop EF区的突变体，其Loop EF区第133位丙氨酸形成供外源表位替换和/或插入的可突变位点以便在体外组装成完整的VLPs。电镜结...
- 王乃东张素姣王东亮杨毅湛洋余婉婷蒋一凡王爱兵
- 猪圆环病毒3型检测和致病性的研究进展被引量：10
- 2019年
- 猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)是2016年首次在美国报道的一种新的猪圆环病毒。之后,中国、波兰、韩国、丹麦、意大利和西班牙等国家陆续报道PCV3单独或混合感染的检测,引起研究人员的广泛关注。目前认为PCV3与母猪繁殖障碍、发热、呼吸系统疾病以及多系统炎症等有一定的相关性,且检测报道预示PCV3会引起新生仔猪先天性震颤和心肌炎等临床疾病。但PCV3确切致病机理仍需进一步调查研究。文中主要对PCV3基因组序列的特点、感染检测和致病性相关报道进行综述,为PCV3流行病学调查和致病机理研究提供参考。
- 蒋一凡张南乡子李周勉张佳鑫张佳鑫王乃东
- 关键词：繁殖障碍
