李子杰
- 作品数：25 被引量：60H指数：3
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重大项目中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学文化科学化学工程更多>>
- 木糖异构酶酿酒酵母孢子“微胶囊”的构建及酶学性质分析被引量：2
- 2015年
- 将来源于嗜热细菌Thermus thermophilus HB8的木糖异构酶(XI)基因xyl A与SPR1信号肽序列(ss)融合后连接到p RS424-TEFpr表达载体上,将重组质粒p RS424-TEFpr-ss-xyl A转化酿酒酵母AN120野生型菌株、osw2Δ缺陷型菌株以及dit1Δ缺陷型菌株并进行产孢。通过荧光定位、蛋白免疫印迹分析以及酶活测定,表明酿酒酵母孢子"微胶囊"固定化酶系统构建成功。由于该固定化酶的最佳反应温度为85℃,避免了酿酒酵母孢子在D-葡萄糖为底物条件下萌发的弊端。同时,根据蛋白免疫印迹分析和重复利用性结果,表明二酪氨酸层的存在对于酶的包埋,对高温的耐受性都表现出了较好的特性。此外对野生型和osw2Δ孢子固定的XI的酶学性质进行了研究,相对于游离酶,孢子固定化酶更加稳定。在p H为6的酸性条件或p H为9的碱性条件下,固定化酶相对酶活能达到60%以上,同时在温度95℃时,固定化的酶相对酶活也能达到60%以上。与野生型孢子相比,osw2Δ孢子展现出了潜在的优势,既可以有效阻止酶的释放,又提高了底物分子的通透性。
- 李毅李子杰中西秀树高晓冬
- 关键词：酿酒酵母孢子木糖异构酶酶固定化
- 筛选特异性抑制酿酒酵母产孢的人类基因
- 2019年
- 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)二倍体细胞在缺乏氮源且存在非发酵型碳源时,营养细胞停止生长,进入产孢过程并通过减数分裂形成单倍体孢子。产孢过程并不存在于哺乳动物细胞中,但该过程中发生的很多细胞活动在真核细胞中存在保守性。作者建立了一个筛选特异性抑制酿酒酵母产孢的人类基因的方法。在酿酒酵母中表达单独的人类基因,筛选得到抑制产孢过程但对酿酒酵母营养细胞生长不产生影响的候选人类基因。获得的候选基因很大可能涉及营养敏感性、减数分裂以及膜运输重组这些产孢过程中发生的细胞活动。本研究对新功能人类基因的发现以及将酿酒酵母作为遗传研究工具有着重要的意义。
- 殷政中西秀树李子杰李子杰藤田盛久高晓冬
- 关键词：酿酒酵母人类基因减数分裂
- 基于Heracles Ⅱ超快速气相电子鼻对不同加工方式牛奶的快速鉴别被引量：24
- 2019年
- 利用HeraclesⅡ超快速气相电子鼻对不同加工方式牛奶中的挥发性有机化合物进行检测。采用主成分分析、样品间区别指数分析和主成分载荷图分析对不同加工方式牛奶挥发性物质的差异性进行比较,结果表明奶粉的整体风味与其他三种不同加工方式样品差异较大,而超巴氏奶与超高温灭菌奶差异较小。结合保留指数和AroChemBase数据库对特异性化合物进行定性及含量分析,结果显示随着加工温度升高,丙酮、2-丁醇、辛二烯、己酸和甲硫醚的含量也随之增多。同时,甲基环己烷羧酸、丙酮、2-丁醇和水芹烯在奶粉的加工工艺中出现了大量的损失。由此得出结论,HeraclesⅡ超快速气相电子鼻能够实现对不同加工方式牛奶的快速鉴别。
- 高雅慧徐良董亚欣李子杰
- 关键词：电子鼻牛奶挥发性成分
- 利用Heracles Ⅱ超快速气相电子鼻对不同品牌UHT全脂牛奶的快速鉴别研究被引量：7
- 2019年
- 本研究利用Heracles Ⅱ超快速气相电子鼻对5种不同品牌(德运、蒙牛、光明、卫岗、伊利)UHT全脂牛奶的风味成分进行主成分分析、样品间区别指数分析和主成分载荷图分析,同时结合Kovat保留指数和Aro Chem Base数据库对特异性化合物进行定性分析。结果表明这5种样品之间均存在着较为明显的差异,样品3和样品5整体风味成分较为相近,然而样品2和样品4则与其他UHT奶的整体风味成分差异较大。其中正丙硫醇和2-甲基-3-呋喃硫醇是1号样品的特定风味化合物,丙酸是2号样品的特定风味化合物,庚烷、己-2-酮和3-甲基呋喃是5号样品的特定风味化合物。
- 高雅慧邱士鸿朱逸浩徐良董亚欣李子杰
- 关键词：全脂牛奶电子鼻风味成分
- 枯草芽孢杆菌来源的碱性果胶酶在毕赤酵母中的高效表达被引量：3
- 2022年
- 以Bacillus subtilis 168来源的碱性果胶酶(PELA)为研究对象,首先采用毕赤酵母密码子偏好性优化,结合G418高浓度抗性筛选策略,构建了PELA突变体工程菌株Pp03;其次,通过信号肽(MF4I、HFBI、W1、Albumin、Invertase 2)优化和分子伴侣(BMH2、HAC1、PDI1、KEX2)共表达,获得一株高效表达PELA的工程菌株Pp13;接着对该菌株摇瓶表达PELA的诱导温度、甲醇添加量进行优化;最后,采用5 L发酵罐进行高密度发酵。结果显示,PELA的基因经过密码子、信号肽以及伴侣因子优化后,实现PELA的酶活分别提高至2.10、7.35、1.49倍,其酶活分别达到39.11、353.87、527.27 U/mL;最佳诱导温度和甲醇添加量分别为26 ℃和1.0%;在最佳诱导条件下,PELA的摇瓶水平酶活达到732.60 U/mL;采用5 L发酵罐进行高密度发酵,PELA的酶活达到2301.05 U/mL。研究结果为碱性果胶酶的工业化应用提供理论依据,同时也为毕赤酵母中异源蛋白的高效表达提供方法参考。
- 陈洲王亚森汪步青许向阳高晓冬李子杰
- 关键词：碱性果胶酶毕赤酵母信号肽分子伴侣高密度发酵
- 酿酒酵母孢子“微胶囊”表面展示乙醛脱氢酶以及检测乙醛的应用
- 2024年
- 乙醛是对人体有毒的化合物,乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)能将乙醛氧化为无毒的乙酸,同时将NAD(P)+转化为NAD(P)H。目前检测乙醛的方法繁琐且耗时费力,该研究采用酿酒酵母孢子“微胶囊”表面展示热带假丝酵母(Candida tropicalis)LBBE-W1来源的乙醛脱氢酶,建立一种新颖快速检测乙醛的方法。首先,基于蛋白质免疫印迹与荧光结果证实ALDH能够在孢子中表达且定位在孢子壁上。然后,测定了孢子表面展示ALDH与游离ALDH的酶学性质。结果显示,孢子表面展示ALDH和游离酶的最适温度与pH值分别为40℃和9.0;与游离酶相比,孢子表面展示ALDH具有更高的活性,以及更佳的温度与pH稳定性。此外,孢子表面展示ALDH对十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、蛋白酶K具有更强的耐受性;孢子表面展示ALDH与游离乙醛脱氢酶的最适底物都是乙醛,并且孢子表面展示ALDH具有良好的重复使用性能。最后,将孢子表面展示ALDH作为生物传感器检测乙醛,结果表明在0~500μmol/L的乙醛浓度范围内具有良好的线性关系,其R2值为0.9992。该研究成功构建一种新颖的生物传感器,为乙醛的检测提供一种新的方法。
- 杜祥坤费康清王亚森白佳文中西秀树李子杰
- 关键词：乙醛脱氢酶生物传感器酿酒酵母
- 甘油激酶的表达纯化及在酮糖合成中的应用
- 2018年
- 研究了大肠杆菌MG1655来源的甘油激酶(GK)的表达及其在酮糖合成中的应用。本研究从大肠杆菌MG1655扩增了甘油激酶的基因片段glpK,连接到表达载体pET-28a上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达,利用Ni^(2+)亲和层析柱纯化目的蛋白。利用该甘油激酶可以催化成本较低的底物甘油生成L-3-磷酸甘油,再经过磷酸甘油氧化酶(GPO)的催化生成磷酸二羟基丙酮(DHAP),生成的DHAP可以在不同的DHAP依赖性醛缩酶的催化下与受体D-甘油醛合成酮糖-1-磷酸,最终用酸性磷酸酶脱掉磷酸生成一系列酮糖。结果表明,该酶成功地用于"一釜多酶法"合成体系中,以便宜的底物甘油为前体,合成出包括稀有糖在内的一系列酮糖,生成的产物、产率及比例用TLC、HPLC进行检测。该方法的建立将为其他稀有糖及其衍生物的合成提供理论依据。
- 吴晓茹李子杰中西秀树高晓冬
- 关键词：醛缩酶酮糖
- osw2对酿酒酵母孢子固定化酶影响的分析
- 2018年
- 构建了α-半乳糖苷酶(Mel1p)的多拷贝质粒pRS426-TEFpr-MEL1,转入酿酒酵母野生型AN120及osw2△突变株并进行固定化酶活性测定。实验分别选取蜜二糖、棉子糖(三糖)与水苏糖(四糖)3种低聚寡糖作为Mel1p的底物,检测两种菌株孢子固定化酶对这3种底物的催化活性,结果表明野生型AN120酵母孢子壁的孔径最大只允许介于三糖和四糖之间的底物通过,四糖不能通过;而osw2△突变株酵母孢子壁的孔径可以允许四糖通过。通过孢子固定化酶保护性实验,发现孢子固定化酶可以完全抵抗2%SDS的处理,也可部分抵抗10%SDS的处理。通过8 mol/L尿素处理后,酶活检测发现野生型AN120酵母孢子可阻挡尿素对孢子固定化酶的影响,而osw2△孢子不能;蛋白免疫印迹分析进一步表明,尿素处理后野生型AN120酵母孢子固定化酶的含量几乎不变,而osw2△突变株孢子固定化酶的含量明显降低,说明尿素可进入osw2△突变株孢子内部溶解并降低固定化酶的含量,但对AN120酵母孢子无影响。本研究也在多种突变株孢子中表达Mel1p,并进行活性比较,发现osw2△,osw2△ydl186w△及osw2△ydr326c△突变株固定化酶均有很高的催化活性。
- 赵强李子杰中西秀树高晓冬
- 关键词：Α-半乳糖苷酶固定化酶
- 糖生物学本硕衔接培养模式初探被引量：2
- 2014年
- 糖生物学是糖的化学和生物学相结合而产生的一门新兴学科。由于现在高校本科教育还未开设糖生物学课程,故尝试在相关课程教学过程中引入糖生物学的概念和知识。建立研究型教学模式,重视实验,引导学生参与教学,培养学生良好的科学素质和创新能力。
- 徐沙李子杰杨刚龙郭佳关锋
- 关键词：糖生物学研究型教学教学改革
- Ogataea minuta来源的内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶的异源表达和纯化
- 2018年
- 在大肠杆菌中表达有活性的Ogataea minuta来源的内切β-N-乙酰氨基葡糖苷酶(EndoOm),利用p ET系统过量表达Endo-Om。在优化宿主菌及培养条件后,镍柱纯化目的蛋白质,并检测纯化后的Endo-Om对荧光标志的寡糖链的水解活性。经IPTG诱导后,目的蛋白质可以很好地表达,但大部分存在包涵体中。通过培养条件优化,16℃在Overnight ExpressTMInstant LB培养基(默克)中培养,实现了Endo-Om在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化,并检测到了纯酶的水解活性。在大肠杆菌中成功纯化了有活性的Endo-Om蛋白,为加速研究该酶的结构和功能奠定了基础。
- 贾元苓喜多岛敏彦李子杰高晓冬中西秀树
- 关键词：异源表达纯化
