秦琴
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 皮秒脉冲电场治疗宫颈癌动物模型的体内效应研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨皮秒脉冲电场(picosecond pulse electric field,ps PEF)治疗裸鼠宫颈癌动物模型的体内效应及机制。方法将36只裸鼠宫颈癌动物模型编号后随机抽取24只分为对照组、脉冲治疗后6 h组、脉冲治疗后12 h组、脉冲治疗后24 h组,每组6只。治疗组给予固定脉冲参数(脉冲个数2 000个,脉宽800 ps,电压70 k V,频率3 Hz)的脉冲电场处理,对照组不予脉冲电场处理。取肿瘤组织,采用HE染色、透射电镜观察肿瘤组织形态学变化。TUNEL试剂盒检测肿瘤组织凋亡程度。JC-1染色激光共聚焦显微镜下检测肿瘤组织线粒体跨膜电位。应用蛋白活性测定试剂盒检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12蛋白活性。其余12只动物模型随机抽取分为治疗组和对照组,脉冲电场处理后每隔3 d测量肿瘤体积,计算相对肿瘤增殖率T/C(%)。结果治疗后肿瘤组织发生不同程度的坏死,以治疗后24 h最重,电镜下可见凋亡小体,以治疗后12 h组多见。各治疗组肿瘤组织凋亡率均高于对照组(P<0.01),12 h组凋亡率明显高于其余两个治疗组和对照组(P<0.01)。脉冲治疗后随时间的延长线粒体膜电位逐渐降低。Caspase-3、Caspase-12蛋白活性检测结果均显示12 h组明显高于其他治疗组和对照组(P<0.01)。Caspase-8、Caspase-9蛋白活性各组之间无明显差异。治疗后3、6、9 d两组肿瘤体积有统计学差异,处理组相对肿瘤增殖率分别为76.87%、71%、68.87%。结论 ps PEF可以作用于宫颈癌动物模型的肿瘤部位,导致肿瘤组织发生坏死及凋亡,早期对肿瘤的生长有一定的抑制作用。
- 秦琴熊正爱贾佳姚成果赵晓震王智亮
- 关键词：宫颈癌动物模型
- 不可逆性电穿孔介导HPV16 E6 shRNA干扰质粒对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响
- 2015年
- 目的:探讨利用治疗剂量脉冲电场产生不可逆电穿孔(IRE)介导HPV16E6shRNA干扰质粒进入细胞的可行性,阐明二者共同作用对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响及其作用机制。方法:将HPV16E6基因特异性干扰序列插入pGenesil-1质粒,构建HPV16E6shRNA真核表达载体,将10个电压为800V、脉宽100μs、频率1Hz的IRE作用于SiHa细胞与HPV 16E6shRNA干扰质粒的混悬液,根据处理因素组合,分为空白对照组、IRE处理组、pGenesil-N组、pGenesil-N+IRE组、pGenesil-E6组和pGenesil-E6+IRE组。在荧光显微镜下观察SiHa细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达,计算GFP表达效率;RT-PCR法检测HPV 16E6mRNA表达水平,Western blotting法检测HPV16E6蛋白、P53及PCNA蛋白表达水平,CCK-8法检测各组SiHa细胞增殖能力的变化。结果:成功构建HPV16E6shRNA真核表达载体,IRE处理后24h细胞即可见到绿色荧光;与IRE组比较,pGenesil-E6+IRE组E6 mRNA表达水平下降(P<0.05),E6蛋白表达水平降低(P<0.05),P53蛋白表达水平增高(P<0.05),PCNA表达水平下降(P<0.05);CCK-8法检测,与pGenesil-E6组比较,pGenesil-E6+IRE组细胞增殖活性下降更明显(P<0.05)。结论:治疗剂量的IRE可介导外源基因进入细胞,二者联合作用能明显抑制宫颈癌SiHa细胞增殖。
- 王智亮余腾骅秦琴吴雨桐张文倩华媛媛熊正爱周玮
- 关键词：电穿孔干扰质粒
