王锦华
- 作品数：4 被引量：12H指数：3
- 供职机构：山西医科大学口腔医学系更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TRAF6沉默对LPS刺激牙周膜成纤维细胞成骨分化的影响
- 2017年
- 目的:使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cell,hPDLC)肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)的基因,观察沉默TRAF6基因对LPS刺激的hPDLC成骨分化的影响。方法:实验分为空白对照组、转染试剂组、TRAF6siRNA组、control siRNA组,采用脂质体法将TRAF6siRNA、control siRNA分别瞬时转染入对应组中,设转染试剂组加入等量的转染试剂,空白对照组不做处理,再使用10 mg/L LPS刺激细胞,RT-PCR、Western blot检测转染后TRAF6的基因及蛋白表达水平,使用LPS+成骨诱导液培养细胞,碱性磷酸酶检测试剂盒检测碱性磷酸酶的活性,RT-PCR检测Runx-2和I型胶原蛋白(Col-I)基因表达情况。结果:TRAF6siRNA组的TRAF6mRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.001);成骨诱导3d后,LPS刺激下各组ALP的表达量要显著低于对照组(P<0.05),TRAF6siRNA组的ALP表达量要高于空白对照、转染试剂组和control siRNA组(P<0.05),TRAF6siRNA的Runx-2和Col-I的mRNA表达均明显高于其余3组(P<0.05)。结论:沉默TRAF6基因能减轻LPS对hPDLC成骨分化的抑制作用,即沉默TRAF6基因能促进LPS刺激下的hPDLC成骨分化,推测TRAF6可能影响牙周炎的发生发展进程,是牙周炎潜在的治疗靶点。
- 陈庆勇李霞张芳王锦华
- 关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6成骨分化脂多糖
- 黄芩苷对脂多糖刺激下人牙周膜细胞IKKα表达影响的初步研究被引量：4
- 2017年
- 目的观察黄芩苷对脂多糖(LPS)刺激下人牙周膜细胞NF-κB非经典途径IKKα表达的影响。方法酶消化法体外分离、培养、鉴定人牙周膜细胞(h PDLCs);CCK-8检测黄芩苷对h PDLCs增殖的影响;实验分空白对照组(NC)、LPS组、LPS+黄芩苷1~4组;酶联免疫吸附试验检测炎性因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的分泌,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检查IKKα蛋白及m RNA的表达。结果 0.001~50 mg/L黄芩苷对h PDLCs增殖起促进作用;ELISA结果显示,LPS组与NC组相比,IL-1β、TNF-α分泌量增加,LPS+黄芩苷1~4组随着黄芩苷浓度的增加炎症因子分泌量减少;Western Blot结果显示IKKα蛋白的表达在LPS组较NC组高,LPS+黄芩苷1~4组较LPS组低,且RT-PCR结果与Western Blot结果相一致。结论黄芩苷介导了LPS刺激下人牙周膜细胞中NF-κB非经典途径IKKα表达下调,对牙周膜细胞的炎症损伤起保护作用。
- 王锦华张芳李霞陈庆勇
- 关键词：脂多糖牙周膜细胞黄芩苷IΚB激酶
- TRAF6沉默对LPS刺激牙周膜成纤维细胞增殖能力的影响被引量：4
- 2017年
- 目的:使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cell,hPDLC)肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)的基因,观察细胞的增殖情况及脂多糖刺激时增殖能力的变化。方法:酶消化联合组织块法体外培养原代hPDLC,并进行免疫组化鉴定,将细胞分为TRAF6siRNA组、control siRNA组、NONE组,脂质体法将TRAF6siRNA、control siRNA分别转染入对应组中,NONE组只加入等量的转染试剂,再使用10mg/L LPS刺激细胞,RT-PCR检测TRAF6mRNA的表达情况,CCK-8检测沉默前后及LPS刺激时细胞增殖能力的改变。结果:免疫组化鉴定hPDLC培养成功;TRAF6siRNA组的TRAF6mRNA的表达水平与NONE、control siRNA组相比显著下降(P<0.001);TRAF6siRNA组在转染后36、48、72h的A值均显著低于相同时间点的2个对照组(P<0.001);使用10mg/L LPS刺激各组细胞24、48h时,TRAF6siRNA组细胞的A值显著低于相同时间点的2个对照组(P<0.001)。结论:沉默TRAF6基因能抑制LPS刺激时hPDLC的增殖,推测TRAF6可能影响牙周炎的发生发展进程,是牙周炎潜在的治疗靶点。
- 陈庆勇李霞张芳王锦华
- 关键词：肿瘤坏死因子受体相关因子6脂多糖细胞增殖
- NF-κB非经典途径IKKα调控的Maspin在人牙周膜细胞中的表达被引量：4
- 2017年
- 目的:观察NF-κB非经典通路IKKα调控的Maspin在HPDLCs中的表达。方法:组织块法原代培养HPDLCs。倒置显微镜及SP免疫组化鉴定细胞来源。免疫细胞化学定位Maspin在HPDLCs中的表达。实验分空白对照组(NC)、LPS_(1-4)组(LPS终浓度为0.1、1、10、50mg/L)。RT-PCR及Western Blot分别检测LPS刺激下HPDLCs中Maspin、IKKαmRNA及蛋白的表达。Elisa检测炎性因子TNF-α和IL-1β的分泌。结果:Maspin在正常与LPS刺激的HPDLCs中均呈胞浆表达。随着LPS浓度增加Maspin蛋白表达下调,LPS_(1-4)与NC组相比(P<0.05);IKKα蛋白表达上调,LPS_(1-4)与NC组相比(P<0.05)。mRNA表达与蛋白表达趋势相同。同时,二者相关性分析可知,Maspin与IKKαmRNA及蛋白表达呈负相关。Elisa结果显示TNF-α、IL-1β随着LPS浓度增加分泌增加,且与Maspin蛋白表达呈负相关。结论:Maspin在HPDLCs中呈胞浆表达,LPS可介导HPDLCs中Maspin表达下调,与TNF-α、IL-1β呈负相关,且Maspin表达下调可能经由NF-κB非经典途径IKKα调控。
- 王锦华张芳李霞陈庆勇
- 关键词：牙周膜细胞IΚB激酶
