熊秋霞
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：昆明医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省科技条件平台建设计划项目云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人乳腺癌细胞特异性多肽跨膜转导机制初步研究
- 2011年
- 目的:初步探讨人乳腺癌细胞MDA-MB-231特异性多肽PI的跨膜转导机制。方法:合成PI肽链,并在其N端进行FITC标记;探讨FITC-PI的跨膜转导与MHC-Ⅰ表达的关系,利用MHC-Ⅰ抗体阻断MDA-MB-231细胞和Calu-1细胞表面MHC-Ⅰ抗原,聚合酶链反应-序列特异性引物法进行基因分析;探讨FITC-PI的跨膜转导是否与小窝蛋白介导的内吞有关,抑制剂制霉菌素与MDA-MB-231细胞共培养,荧光显微镜观察以及流式细胞仪检测细胞内FITC-PI分布情况;探讨FITC-PI跨膜转导是否与2株细胞表面相同的膜蛋白有关系,膜蛋白提取试剂盒分别提取2株细胞膜蛋白,双向电泳对其进行差异性分析。结果:MHC-Ⅰ抗体阻断后,2株细胞内仍可见FITC-PI分布,基因位点分析显示2株细胞HLA-A、B位点等位基因不同;加入制霉菌素后,镜下观察及流式细胞仪检测均显示FITC-PI分布减少;双向电泳初步分析2株细胞膜蛋白图谱共有11个相同的蛋白点。结论:PI的跨膜转导机制不单一,其一,部分由小窝蛋白介导的内吞机制,其二,可能与2株细胞表面相同的膜蛋白有关系,此研究为将来继续探讨其跨膜转导机制奠定了实验基础和理论依据。
- 缪延栋陈青高嫦娥刘为青熊秋霞耿计伟李秋恬李臣董坚
- 关键词：细胞穿透肽乳腺癌跨膜转导
- 乳腺癌特异性多肽介导生物大分子体内外效应
- 2012年
- 探讨乳腺癌特异性多肽PI携带外源性生物大分子靶向抗肿瘤的作用.将分离纯化获得的融合蛋白PI-EGFP与靶细胞MDA-MB-231体外共培养,探讨融合蛋白与靶细胞的结合能力;将此融合蛋白经尾静脉及肿瘤局部注射入荷瘤裸鼠体内,探讨其在肿瘤部位的聚集程度;利用分子克隆技术构建重组原核表达载体pET-28a(+)-pI-tk,诱导表达、分离纯化、鉴定获得的融合蛋白PI-HSV-TK,将不同浓度的融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,经更昔洛韦(ganciclovir,GCV)作用后,探讨PI-HSV-tk对细胞的靶向杀伤效应.荧光显微镜下观察,在靶细胞内可检测到绿色荧光信号,经尾静脉及局部注射融合蛋白PI-EGFP后,在不同组织器官可见不同强度的荧光信号,在尾静脉注射组的肾脏和肿瘤部位可检测到荧光信号,而局部注射组仅在肿瘤部位可检测到;成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-pI-tk;分离纯化获得高效表达的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定融合蛋白的表达正确;CCK-8法及流式细胞仪检测显示,GCV对转导融合蛋白的MDA-MB-231细胞有杀伤作用,IC50值为152.64μg/mL.乳腺癌特异性转导多肽能携带生物大分子进入靶细胞,并携带具有杀伤效应的物质,使其发挥靶向治疗作用,为进一步探讨该多肽作为靶向性载体奠定实验基础和理论依据.
- 耿计伟高嫦娥刘为青熊秋霞缪延栋周华华董坚
- 关键词：靶向治疗
- TACE联合CIK治疗原发性肝癌方案分析被引量：6
- 2012年
- 目的探讨对原发性肝癌患者进行肝动脉栓塞化疗(TACE)联合CIK细胞免疫治疗方案的临床价值。方法选取治疗效果明显的1例原发性肝癌病例进行分析,患者于TACE术后2周开始序贯完成3个疗程经肝动脉CIK细胞回输及3个疗程经外周静脉CIK细胞回输,同时对患者各项检查指标进行持续监测。结果 18个月后复查结果显示肝功能未见明显异常,AFP正常,HBV-DNA拷贝降低转阴,机体免疫水平提高,肝脏CT未见复发。结论 TACE联合CIK细胞免疫治疗是一种新型的原发性肝癌综合治疗方法,它在杀伤肿瘤细胞的同时还能明显降低乙肝病毒体内含量,提高机体免疫力,从而阻断致癌因素,对抑制肝癌的复发和转移具有重要意义。
- 陈晓何敏洁董坚高嫦娥熊秋霞
- 关键词：CIK治疗原发性肝癌
- 乳腺癌特异性多肽介导的HSV-TK/GCV系统的构建及其靶向杀伤效应被引量：2
- 2011年
- 目的:研究乳腺癌MDA-MB-231细胞特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统对乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外靶向杀伤作用。方法:以PCR从质粒pORF-HSV-TK中扩增目的基因PI-TK,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-PI-TK载体,转化宿主菌,经IPTG诱导表达PI-TK融合蛋白,利用His-Tag对其进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白。将不同质量浓度的PI-TK融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,联合更昔洛韦(ganci-clovier,GCV)作用后,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞的增殖。结果:成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-PI-TK,获得纯化的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE及Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白表达正确。单独PI-TK融合蛋白不影响MDA-MB-231细胞的形态和增殖,但PI-TK融合蛋白联合GCV能剂量依赖性靶向抑制MDA-MB-231细胞的增殖,200μg/ml PI-TK+10 mg/LGCV作用的抑制率达(68.9±7.57)%;PI-TK联合GCV抑制MDA-MB-231细胞的IC50值为152.64μg/ml。上述各作用对MDA-MB-435细胞均无影响(P<0.05)。结论:乳腺癌特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统可靶向杀伤MDA-MB-231细胞。
- 耿计伟董坚刘为青高嫦娥熊秋霞缪延栋周华华李秋恬李臣
- 关键词：MDA-MB-231细胞靶向性
