周振兴
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
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- 相关领域：生物学更多>>
- 重组肠激酶在大肠杆菌中的发酵与纯化被引量：2
- 2006年
- 对重组肠激酶在大肠杆菌中的高密度发酵表达条件、纯化方法及其生物活性测定进行了研究。结果表明:在E.coli表达系统中,控制温度为37℃,培养基pH 7.4,当A600为8.0时,加入0.3mmol/LIPTG进行诱导,温度降低至30℃,连续诱导3 h,蛋白表达量达25%。经SDS-PAGE测定,纯化的重组肠激酶纯度达80%以上,并能高效切开融合蛋白。
- 曹志飞李新平范开梅翔周振兴
- 关键词：大肠杆菌发酵纯化生物活性
- 重组牛肠激酶轻链基因在毕赤酵母中的表达与纯化被引量：2
- 2006年
- 目的:构建重组牛肠激酶轻链的基因工程菌,并进行表达和纯化,以获得高纯度和高活性的重组牛肠激酶轻链蛋白。方法:以GenBank公共数据库中的牛肠激酶轻链基因序列(AccessionNo.NM174439)设计引物,利用RT-PCR合成牛肠激酶轻链基因片段,并克隆进pPIC9K载体,同时在基因N端插进6个组氨酸标签,转化毕赤酵母GS115,进行筛选和诱导表达。产物经镍离子螯和层析和Q-SepharoseFF柱纯化,并酶切融合蛋白检测其活性。结果:培养液中重组牛肠激酶轻链蛋白表达量为3.0mg/L。对含有肠激酶酶切位点的IL-11/MBP融合蛋白进行酶切,结果表明,酶解率可达到90%以上。结论:表达并获得了高纯度的重组肠激酶轻链蛋白,为大规模生产打下了基础。
- 曹志飞李新平范开李静梅翔周振兴
- 关键词：毕赤酵母分泌表达活性分析
- 重组牛肠激酶轻链基因在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：1
- 2005年
- 肠激酶(Enterokinase,EK,EC3.4.21.9)是一种以异源二聚体形式存在于哺乳动物十二指肠内的丝氨酸蛋白酶,通过在位点(Asp)4-Lys的羧基端进行高效特异酶切,将胰蛋白酶原激活为胰蛋白酶。以GenBank公共数据库中牛肠激酶轻链基因序列(Acces-sion No.NM174439)设计引物,利用RT-PCR方法合成牛肠激酶轻链基因片段,并克隆进pET39b载体中DsbA片段的C’端,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得DsbA/牛肠激酶轻链融合蛋白。经镍离子螯合层析纯化,每升培养液中可得到2.7-3.0mg重组牛肠激酶。对含有肠激酶酶切位点的IL-11/MBP融合蛋白进行酶切,结果表明,酶解率可达到95%以上,为重组牛肠激酶的大规模生产打下了基础。
- 李静李新平曹志飞范开梅翔周振兴
- 关键词：分泌表达融合蛋白活性分析
