刘梦茜
- 作品数：13 被引量：10H指数：1
- 供职机构：福建农林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家级星火计划福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸡真核生物翻译起始因子2α的原核表达与多克隆抗体的制备被引量：1
- 2018年
- 为了获得鸡源真核生物翻译起始因子2α(Eukaryotic translation initiation factor alpha two,eIF2α)的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了eIF2α基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-eIF2α。将其转化BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功表达出分子量约51 ku的重组融合蛋白。该融合蛋白表达时的最佳诱导时间、诱导温度和IPTG浓度分别为10 h、45℃和1.5 mmoL/L。通过对该蛋白进行Ni^(2+)柱亲和层析纯化,得到了较高纯度的重组蛋白。将纯化后的eIF2α蛋白免疫新西兰黄兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶8 000,试验结果为后续eIF2α蛋白功能的研究提供了帮助。
- 袁晓琴陈仕怡刘梦茜李春燕许丽惠周五朵吴异健王全溪
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 鸡PERK的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2017年
- 根据鸡的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)基因序列进行抗原肽分析,选择含大片段抗原表位区约1 500 bp的一段基因(15~1 515 bp)设计一对特异性引物后进行RT-PCR扩增,并构建pET-32a(+)-PERK重组质粒,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中.优化诱导表达条件,纯化重组蛋白后免疫兔并制备多克隆抗体.PCR鉴定、酶切鉴定和测序结果表明,pET-32a(+)-PERK重组质粒构建成功.SDS-PAGE电泳鉴定结果表明,重组蛋白在1.0 mmol·L-1IPTG、25℃下诱导9 h时的表达量最大.蛋白纯化结果表明,100 mmol·L-1咪唑洗脱液可较好地洗脱重组蛋白,获得较多的纯化蛋白.免疫结束后,抗体效价检测结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶32 000,可以与重组蛋白特异结合.
- 袁晓琴刘梦茜李春燕陈仕怡许丽惠周五朵吴异健王全溪
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 鸭坦布苏病毒LH株E蛋白基因的克隆与结构被引量：1
- 2016年
- 采用分子克隆技术对鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白基因进行克隆,同时运用多种生物学软件对该基因进行结构和生物学功能预测和分析.结果表明,本试验成功克隆了DTMUV LH株E蛋白基因,该基因包含一个1 500 bp的开放阅读框,编码500个氨基酸.遗传进化树分析表明,该蛋白与我国其他省份分离株的同源性很高.该蛋白的分子质量为54.3 ku,等电点为7.63,不存在信号肽序列,含有17个糖基化位点,有13个丝氨酸、4个络氨酸和8个苏氨酸的磷酸化位点.该蛋白存在跨膜区域,为亲水性蛋白.抗原位点分析表明,该蛋白有21个抗原肽段.本试验结果为E蛋白的生物学功能和致病机理的研究奠定重要的分子理论基础.
- 庄育彬王伟许丽惠刘梦茜星东蔡一龙温亚萍吴宝成王全溪
- 关键词：E蛋白基因克隆信号肽
- 采用PCR-RFLP法鉴别IBDV强毒BC6/85株和弱毒B87株
- 2019年
- 选取传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒力代表株BC6/85和弱毒力代表株B87为研究对象,根据VP2基因保守区设计一对通用引物和两个限制性内切酶位点,分别扩增两个毒株的VP2基因,然后进行BamHⅠ和PstⅠ酶切,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)分析酶切产物,并进行特异性、敏感性和重复性检测.结果表明:所设计的引物均可扩增两个毒株的VP2基因,大小约856 bp;经BamHⅠ和PstⅠ酶切后,BC6/85株的PCR产物被BamHⅠ和PstⅠ切出166、242和449 bp大小的3个片段,而B87株仅被PstⅠ切出242和615 bp大小的2个片段,且重复性好,特异性强.可见,采用PCR-RFLP分析IBDV VP2基因的方法操作简单,是一种能够快速鉴别IBDV强、弱毒株的可靠方法.
- 陈仕怡陈媛赖隆永李春燕刘梦茜袁晓琴郑庆礼许丽惠王全溪
- 猪流行性腹泻病毒M蛋白的原核表达
- 近年来,猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)给哺乳仔猪造成了严重的损失.M蛋白是PEDV重要的跨膜结构蛋白,是基因工程疫苗和诊断试剂的理想抗原.本实验设计M基因的特...
- 刘梦茜李春燕陈仕怡袁晓琴星东王全溪
- 关键词：猪流行性腹泻病毒M蛋白重组蛋白原核表达
- 基于ORF3蛋白的PCV2间接ELISA诊断方法的建立
- ORF3蛋白是猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2,PCV2)的一个重要的非结构蛋白.根据GenBank数据库中PCV2的ORF3编码基因序列设计引物,以PCV2基因组为模版进行PCR扩增,并...
- 李春燕刘梦茜陈仕怡袁晓琴星东庄育彬王全溪
- 关键词：猪圆环病毒2型感染抗体检测间接ELISA法
- 三株大肠杆菌毒力因子的分子生物学分析被引量：1
- 2017年
- 为了鉴别3株大肠杆菌所含有的不同毒力因子,试验采用水煮法分别提取了3种菌株(XM株、NP株、MH株)的DNA,根据Gen Bank数据库提供的产毒素致病性大肠杆菌常见的3种毒素基因序列(LTN、STa和VT2e)设计了相应的特异性引物,以此进行PCR扩增,最后用1%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。结果表明:XM株大肠杆菌含有VT2e毒素,NP株大肠杆菌含有LTN毒素,MH株大肠杆菌3种毒素基因均未见表达。说明分离鉴定的3株大肠杆菌所含毒力因子不同,毒力因子的类型可能与大肠杆菌的致病性密切相关。
- 刘梦茜蔡一龙苏琴吴宝成王全溪
- 关键词：大肠杆菌毒力因子DNA提取引物设计PCR
- 新-法二联灭活疫苗免疫不同日龄商品蛋鸡的效果被引量：1
- 2017年
- 为探讨新城疫-传染性法氏囊病二联灭活疫苗(ND-IBD二联灭活苗)对不同日龄商品蛋鸡的免疫效果,选择360只1日龄商品蛋鸡,分别于1、7日龄接种ND-IBD二联灭活苗,对照组接种灭菌生理盐水,分别于21-56日龄,每隔7d采血,分离血清,检测ND和IBD抗体水平,剖检取脾脏与法氏囊观察病变,荧光定量PCR检测免疫因子CD4^+、CD8^+、IL-6、IFN-βmRNA表达量,并进行攻毒保护试验。结果表明,1、7日龄商品蛋鸡接种ND-IBD二联灭活苗,其ND和IBD的抗体水平均有效提高,且在免疫后可以有效保护IBDV强毒的感染,但7日龄免疫效果更好。免疫因子的mRNA表达量检测结果表明,7日龄接种疫苗的免疫组免疫因子CD4^+、CD8^+、IL-6、IFN-β的mRNA表达量明显高于对照组1日龄。综上,ND-IBD二联灭活疫苗7日龄免疫商品蛋鸡免疫效果更好。
- 星东刘梦茜袁晓琴李春燕陈仕怡江兴华赵华娥包松英王全溪
- 关键词：新城疫传染性法氏囊灭活苗
- 猪流行性腹泻病毒M蛋白的原核表达被引量：1
- 2017年
- 本试验设计了M基因的特异性引物,扩增了M基因,成功构建了重组质粒,并转化至Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞中,优化了异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达条件.结果表明,重组表达的融合蛋白Pet-32a-M大小约为43 ku,与预期大小相符.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表明,M蛋白为包涵体蛋白,且在IPTG浓度为0.8 mmol·L-1,温度为37℃,诱导时间为8 h的条件下,蛋白表达效果最佳.蛋白免疫印迹检测结果进一步显示,重组蛋白Pet-32a-M在体外可以被成功表达.
- 刘梦茜李春燕陈仕怡袁晓琴星东王全溪
- 关键词：猪流行性腹泻病毒M蛋白原核表达
- MDRV p10.8蛋白经内质网应激途径诱导细胞凋亡的Bip/IRE1/XBP1信号通路研究
- 番鸭呼肠孤病毒病是由番鸭呼肠孤病毒（Muscovy duck reovirus,MDRV）感染引起的一种高发病率和致死率的急性传染病,主要危害7-40日龄的水禽,以番鸭为主。该病毒的感染主要影响番鸭的育雏及存活率,感染宿...
- 刘梦茜
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒内质网应激细胞凋亡信号通路
- 文献传递
