公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-6

全选清除导出

排序方式：

应用CRISPR/Cas9编辑广东小耳花猪MSTN基因被引量：2: 2017年; MSTN基因是肌肉生长抑制基因,破坏MSTN基因的表达成为提高畜禽肌肉产量的有效途径。通过应用CRISRP/Cas9编辑技术对广东小耳花猪MSTN基因的外显子区域进行编辑,破坏MSTN基因的读码框来抑制其表达,从而提高广东小耳花猪的肌肉产量。共设计了6条靶向MSTN基因3个不同外显子的gRNA,经过T7E1酶切检测和TA克隆分析,发现其中3条gRNA能够发生有效切割,其中切割效率最高的达28.3%,最低为17.0%。gRNA1-1和gRNA3-3突变的广东小耳花猪PEF细胞系,突变效率均在50%以上,其中三号外显子上突变位点的突变率达到61.5%。试验结果为后续进行体细胞核移植,生产MSTN基因编辑的广东小耳花猪奠定了基础。; 王敏黄翔石翾刘小凤曾检华刘小红陈瑶生何祖勇; 关键词：MSTN

利用CRISPR/Cas9系统构建人HPRT1基因定点突变细胞株被引量：5: 2019年; Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase1(HPRT1)基因突变会导致次黄嘌呤和鸟嘌呤代谢异常,严重的代谢障碍被称为Lesch-Nyhan综合征,表现为智力低下,行为上出现强迫性自我毁伤,并伴随痛风或肾结石等症状。HPRT1基因具有多种突变模式,近年来对其突变谱的研究表明该基因具有一些"突变热点"。本研究选取了导致翻译提前终止的热点突变c.508C>T突变和c.151C>T突变,在HEK293T和HeLa细胞中,以单链寡核苷酸(single-stranded oligo-deoxyribonucleotides,ssODN)作为同源重组模板,利用CRISPR/Cas9技术构建了这两种突变的单克隆细胞株,发生定点突变的效率分别为16.3%和10%。进一步通过Westernblot检测点突变的单克隆细胞的HPRT1蛋白表达水平,通过6-TG毒性实验检测点突变的单克隆细胞的次黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性,结果表明纯合突变的单细胞克隆不能正常表达HPRT1蛋白,其次黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性丧失;杂合突变的单细胞克隆的HPRT1蛋白表达量降低,仍具有部分次黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性。HPRT1基因定点突变细胞模型的建立可为今后建立其他HPRT1基因突变的细胞系或动物模型提供借鉴,为研究Lesch-Nyhan致病机制提供基础。; 张楷刘蔚刘小凤陈瑶生刘小红何祖勇; 关键词：基因定点突变

利用CRISPR/Cas9编辑广东小耳花猪IGF2基因: IGF2(Insulin-like Growth Factor 2)基因作为最复杂多样的生长因子之一,对猪胎儿发育以及出生后生长发育和肌肉生成起着非常重要的作用。研究表明IGF2基因内含子3的3072位点发生G>A突变能...; 刘小凤王敏刘小红陈瑶生何祖勇; 关键词：IGF2基因

ZFN,TALEN和CRISPR/Cas9在小鼠Rosa26基因定点整合外源基因的效率比较被引量：1: 2020年; 哺乳动物黑色素的合成依赖于酪氨酸的氧化作用,而酪氨酸酶(Tyr)是催化酪氨酸氧化反应的关键酶,当外源Tyr基因整合进白毛色小鼠基因组中,会使它获得黑色素合成的能力,表现出与原来不同的毛色表型。为方便、快捷地获得Tyr基因整合的小鼠,构建了一个无启动子的pTyr-2A-DsRed同源重组质粒供体,选择Rosa26的第一个内含子作为外源基因整合的靶位点,设计了切割位点几乎一致的ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9系统。通过流式对比分析C 2C 12细胞中红色荧光蛋白DsRed的表达水平,比较了3种基因组编辑工具介导的外源基因定点整合效率,结果发现CRISPR/Cas9的效率最高,在此基础上,利用CRISPR/Cas9将供体整合到小鼠胚胎干细胞中,筛选单细胞克隆进行囊胚腔注射和胚胎移植,获得一只存活的嵌合体小鼠,表现出白毛中夹杂黑毛的表型,表明整合到小鼠Rosa26的Tyr基因可以正常表达。; 刘小凤刘蔚聂宇丛佩清刘小红陈瑶生何祖勇; 关键词：TALEN

应用RGS双荧光替代性报告载体提高CRISPR/Cas9对猪BMP15基因的打靶效率被引量：5: 2017年; 我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因,然而目前在家猪BMP15基因中尚未发现类似绵羊多胎品系的天然突变。基于高等哺乳动物基因功能的保守性和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因组编辑技术对动物基因组定点修饰的高效性,应用CRISPR/Cas9技术对家猪BMP15基因进行精确的遗传修饰,使家猪获得类似多胎绵羊的天然突变,对于研究该基因对家猪繁殖力的影响以及培育高繁殖力家猪新品系具有重要的意义。本研究通过CRISPR/Cas9对长白猪胎儿成纤维(porcine embryonic fibroblasts,PEF)细胞中BMP15基因进行打靶,T7E1分析显示打靶效率仅有5%。随后通过共转染RGS双荧光替代性报告载体(RFP-GFP surrogate reporter),并应用流式细胞术分选出双荧光细胞,富集到基因组被CRISPR/Cas9修饰的细胞,使基因打靶效率提高至18%。本研究结果表明,应用RGS双荧光替代性报告载体可以有效提高CRISPR/Cas9在PEF细胞中对BMP15基因的打靶效率,为今后通过体细胞核移植技术培育BMP15基因编辑猪进行了有效的探索。; 王敏石翾黄翔刘小凤覃玉凤刘小红陈瑶生何祖勇; 关键词：BMP15基因

利用CRISPR/Cas9编辑广东小耳花猪IGF2基因: IGF2(Insulin-like Growth Factor 2)基因作为最复杂多样的生长因子之一,对猪胎儿发育以及出生后生长发育和肌肉生成起着非常重要的作用。研究表明IGF2基因内含子3的3072位点发生G>A突变能...; 刘小凤王敏刘小红陈瑶生何祖勇; 关键词：IGF2基因; 文献传递

全选清除导出

共1页<1>

刘小凤

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

刘小凤

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈